使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: JC病毒染料法荧光定量PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63556
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
款冬酮(标准品)英文名称: Celite, acid-washedG蛋白偶联受体109A抗体包装5g
葵花盘(标准品)英文名称: Celite® 545γ-衔接蛋白相关蛋白1抗体包装1g
昆明山海棠(标准品)英文名称: Chlorhexidineγ-衔接蛋白相关蛋白2抗体包装25g
蜡梅碱英文名称: β-Citronellolγ-衔接蛋白相关蛋白3抗体包装5g
辣椒碱,辣椒素(天然提取)英文名称: Carbendazim solution配子**素抗体包装1g
辣椒碱,辣椒素(天然提取标准品)英文名称: Carbendazim solutionγ谷氨酰转肽酶2重链抗体包装250mg
辣蓼(标准品)英文名称: Chryseneγ-谷氨酰转肽酶5重链抗体包装5g
莱苞迪甙A(标准品)英文名称: Carbaryl磷酸化GATA结合蛋白3抗体包装100mg
莱苞迪甙C(标准品)英文名称: Chlorpyrifos磷酸化GATA结合蛋白3抗体包装500mg
莱苞迪甙D(标准品)英文名称: Cyromazin solution延伸因子G2抗体包装1g
莱苞迪苷G英文名称: Clofentezine葡糖淀粉酶抗体包装25g
莱菔子(标准品)英文名称: Clofentezine solution谷氨酰6-磷酸果糖转移酶抗体包装5g
兰雪醌,白花丹醌,白花丹素(标准品)英文名称: Clofentezine solution谷胱甘肽S转移酶θ抗体包装100mg
蓝布正(标准品)英文名称: Carboxine谷胱甘肽S转移酶θ2抗体包装25mg
榄香素英文名称: Cyclohexanolγ-谷氨酰转肽酶6抗体包装25g
JC病毒染料法荧光定量PCR试剂盒TP53I11 Antibody灰黄青霉拉丁属名: Penicillium griseofulvum
TOX Antibody嗜气单胞菌拉丁属名: Aeromonas hydrophila
TP53BP2 Antibody金黄壳囊孢用途: 生产代谢产物
TP53AIP1 Antibody植物乳杆菌拉丁属名: Lactobacillus plantarum
TP53I3 Antibody深绿木霉拉丁属名: Trichoderma atroviride
TP53INP2 Antibody芦竹节菱孢菌拉丁属名: Arthrinium arundinis
TP53INP1 AntibodyHyphomicrobium zavarzinii拉丁属名: Hyphomicrobium zavarzinii
TP53I3 Antibody酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
TP63 Antibody完州郡金黄杆菌拉丁属名: Chryseobacterium wanjuense
TPD52L2 Antibody柠檬两面神菌拉丁属名: Janibacter melonis
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。