产品参数: 产品名称: 分枝杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 规格: 50次 货号:BH-P63613 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。 使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延��是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 岩白菜素(标准品)英文名称: L-Glutamic acid γ-benzyl ester羟基类固脱氢酶3α抗体包装5g 岩大戟内酯B(标准品)英文名称: L-Phenylalanine benzyl ester hydrochloride 同源异型盒基因HLX1蛋白抗体包装1g 岩黄连(标准品)英文名称: L-Proline benzyl ester hydrochloride三羟基三基辅酶A合成酶1包装25g 盐酸巴马汀,盐酸掌叶防己碱(标准品)英文名称: L-Arginine L-glutamate热休克因子1抗体包装5g 盐酸川芎(标准品)英文名称: L-Arginine AKG 2:1磷酸化热休克因子1抗体包装1g 盐酸番茄碱(标准品)英文名称: S-Acetamidomethyl-L-cysteine hydrochloride热休克蛋白71抗体包装1g 盐酸黄柏碱(标准品)英文名称: O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride微丝相关蛋白hHBrk1抗体包装250mg 盐酸黄连碱(标准品)英文名称: L-Alanine isopropyl ester hydrochloride植烷酰辅酶A羟化酶2抗体包装5g 盐酸毛果芸香碱(标准品)英文名称: Methyl L-asparaginate monohydrochlorideA型流感病H9N1神经氨酸酶型抗体包装1g 盐酸青藤碱(标准品)英文名称: L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochlorideA型流感病H9N1血凝素型抗体包装500mg 盐酸去氢骆驼蓬碱(标准品)英文名称: L-Glutamine t-butyl ester hydrochloride人类状瘤病33抗体包装1g 盐酸石蒜碱(标准品)英文名称: L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester hydrochloride A型病H1N1蛋白抗体包装25g 盐酸甜菜碱(标准品)英文名称: Bzl-Gly-OH·HCl型肝炎病聚蛋白VP1抗体包装5g 分枝杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒盐酸小檗(标准品)英文名称: Glycine benzyl ester hydrochloride造血干特异性蛋白抗体包装1g 盐酸小檗碱(标准品)英文名称: L-Isoleucine t-butyl ester hydrochloride转化生长因子β1诱导转录因子1抗体包装250mg
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使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延��是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 岩白菜素(标准品)英文名称: L-Glutamic acid γ-benzyl ester羟基类固脱氢酶3α抗体包装5g
岩大戟内酯B(标准品)英文名称: L-Phenylalanine benzyl ester hydrochloride 同源异型盒基因HLX1蛋白抗体包装1g
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盐酸甜菜碱(标准品)英文名称: Bzl-Gly-OH·HCl型肝炎病聚蛋白VP1抗体包装5g
分枝杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒盐酸小檗(标准品)英文名称: Glycine benzyl ester hydrochloride造血干特异性蛋白抗体包装1g
盐酸小檗碱(标准品)英文名称: L-Isoleucine t-butyl ester hydrochloride转化生长因子β1诱导转录因子1抗体包装250mg