使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 斜纹夜蛾核型多角体病毒PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63626
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
紫花前胡苷(标准品)英文名称: Histrelin Acetate组蛋白去乙酰化酶11抗体包装25g
紫花前胡苷元英文名称: Penicillin V potassium salt磷酸化***敏感脂肪酶抗体包装5g
紫花前胡素英文名称: 2'-deoxyinosineHHO1蛋白抗体包装25g
紫金莲(标准品)英文名称: Nifekalant hydrochloride磷酸化染色质相关蛋白1-γ抗体包装5g
紫金龙(标准品)英文名称: Nifekalant hydrochloride磷酸化***敏感脂肪酶抗体包装1g
紫蓳灵(标准品)英文名称: Sincalid(CCK-8)磷酸化组蛋白H1.4抗体包装5g
紫荆皮(标准品)英文名称: Thymosin α1 Acetate羟酰谷胱甘肽解酶蛋白抗体包装5g
紫萁酮(标准品)英文名称: Orbifloxacin磷酸化组蛋白去乙酰化酶5抗体包装100g
紫色姜(标准品)英文名称: Orbifloxacin人巨病抗体包装25g
紫杉(标准品)英文名称: Thymosin β4 Acetate磷酸化组蛋白去乙酰化酶4/5/7抗体包装5g
紫苏梗(标准品)英文名称: 2-Fluoro-1,3-dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate磷酸化HER2受体抗体包装1g
紫苏(标准品)英文名称: OBESTATIN (RAT)磷酸化***敏感脂肪酶抗体包装25g
紫苏烯英文名称: Benzethonium Chloride肝癌上调蛋白抗体包装5g
紫苏叶(标准品)英文名称: β-Amyloid Peptide (1-42), ratHRAS样抑制因子3抗体包装1g
紫苏子(标准品)英文名称: Angiotensin I human acetate salt hydrate丝氨酸羧半胱氨酸合成酶抗体包装25g
斜纹夜蛾核型多角体病毒PCR试剂盒脱氧胞苷脱氨酶蛋白抗体凝血酶受体(TR)检测试剂盒TR ELISA Kit
蛋白激酶锚定蛋白13抗体凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)检测试剂盒TAT ELISA Kit
AP-1μ2抗体凝溶胶蛋白(Gelsolin)检测试剂盒Gelsolin ELISA Kit
肥大膜抑制性受体Allergin1抗体尿微量白蛋白(ALB)检测试剂盒ALB ELISA Kit
脑钠通道蛋白1抗体尿嘧啶核苷磷化酶1(UPP1)检测试剂盒UPP1 ELISA Kit
肌动蛋白相关蛋白2/3复合亚单位B1抗体尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)检测试剂盒PLAUR/uPAR ELISA Kit
三磷腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)检测试剂盒uPA ELISA Kit
胎蛋白抗体内脂素/内脏脂肪素(visfatin)检测试剂盒visfatin ELISA Kit
****扩张性共济失调症突变蛋白抗体内脏脂肪特异性丝氨蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒vaspin ELISA Kit
旋转异构酶FKBP6抗体IFN- Beta/FITC 荧光素标记抗人干扰素-β抗IgG
4号染色体开放阅读框43抗体IFN- Gamma/FITC 荧光素标记干扰素-γ抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。