使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 侧孢短芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63627
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
紫檀芪(标准品)英文名称: Angiotensin III,human 癌高表达蛋白Hec1抗体包装5g
紫檀香(标准品)英文名称: Apamin 磷酸化***敏感脂肪酶抗体包装1g
紫菀(标准品)英文名称: Clomiphene citrate组蛋白去乙酰化酶1抗体包装1g
紫菀酮(标准品)英文名称: SR3335;ML176半乳糖基转移酶2抗体包装5g
紫云英苷(标准品)英文名称: SU5416 磷酸化异染色质蛋白1抗体(果蝇)包装1g
自然铜(醋煅)(标准品)英文名称: Milbemycin oxime异染色质蛋白1磷酸化抗体(果蝇)包装5g
棕榈酸(标准品)英文名称: Valdecoxib缺氧诱导因子2α /HIF-2α抗体包装100g
棕矢车菊素(标准品)英文名称: Gastrin I,human 型流感病M2抗体包装25g
走马胎(标准品)英文名称: Uridine 5'-diphosphoglucuronic acid trisodium salt热休克蛋白-47抗体包装5g
祖师麻(唐古特瑞香)(标准品)英文名称: Ticarcillin disodium salt人类状瘤病16抗体包装25mg
钻山风(标准品)英文名称: Ticarcillin disodium salt缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1α包装25g
醉椒素英文名称: Arg-Gly-Asp 组蛋白H3抗体包装5g
醉鱼草皂苷IVb(标准品)英文名称: Heparin lithium人类疱疹病8抗体/疱疹病8型包装100g
多巴(标准品)英文名称: Secretin Acetate人类巨病抗体包装25g
樟脑(标准品)英文名称: Thymol人类疱疹病8抗体包装5g
侧孢短芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒脱氧核糖核酶γ抗体山梨(标准品) Cinoxacin
死亡相关转录因子1抗体麝香草酚(标准品) Norandrostenedione
脱氧核糖核酶1抗体上腺色腙(卡巴克洛)标准品 Dapagliflozin propanediol hydrate
脱氧核糖核酶2抗体生物素(标准品) Anacetrapib;MK0859
死亡防卫蛋白1抗体十八烷,1-十八(标准品) Dabigatran etexilate
Duffy血型趋化因子受体抗体十二烷硫钠(标准品) Rivaroxaban
DEK癌因结合蛋白石胆(标准品) Rivaroxaban
PSD95结合蛋白1抗体舒巴坦钠(标准品) Apixaban
PSD95结合蛋白2抗体舒巴坦(标准品) Perifosine
细丝蛋白3抗体IFN- Gamma/FITC(Interferon Gamma) 荧光素标记抗大、小鼠IFN-γ抗IgG
细丝蛋白2抗体IFNGR2/FITC 荧光素标记干扰素-gamma受体2抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。