使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛传染性胸膜肺炎PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63634
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关���。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
4-基伞形酮-β-D-木糖苷英文名称: N-Acetylglycine小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体包装5g
4-羟基喹唑啉英文名称: Ac-Ala-OH铁调节蛋白/铁调素抗体包装1g
4-硝基儿茶酚(标准品)英文名称: N-Acetyl-D-alanine热休克蛋白J1抗体包装5g
4’-O-基补骨脂查尔酮B英文名称: N-Acetyl-L-Glutamine发状分裂相关增强子-5抗体包装25g
4β-羟基黄芪紫檀烷苷(标准品)英文名称: N-Acetyl-L-Tyrosine磷酸化热休克蛋白90α抗体包装5g
5,7,4'-三羟基-8-基二氢黄酮(标准品)英文名称: Methyl orange磷酸化组蛋白H2AX抗体包装100g
5,7-二羟基色原酮英文名称: Disperse Orange 13磷酸化组蛋白H3抗体包装25g
5-O-基维斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-...英文名称: Acid Orange 74磷酸化组蛋白H3抗体包装5g
5-O-基维斯阿米苷(标准品)英文名称: Crocein Orange G磷酸化组蛋白H3抗体包装5g
5-羟基糠(标准品)英文名称: Isatin组蛋白去乙酰化酶5抗体包装100g
5-羟色酸(标准品)英文名称: Nebivolol hydrochlorideA型流感病H5N1凝集素包装25g
5-羟色盐酸盐(标准品)英文名称: Nebivolol hydrochloride人巨病UL49蛋白抗体包装500g
6'''-阿魏酰斯皮诺素英文名称: Nuclear fast red肝核因子1β/HNF-1β抗体包装1g
6''-O-二酰基染料木苷英文名称: CarmineHHLA3蛋白抗体包装25g
6''-二酸沙苑子苷单酯英文名称: Bromophenol redHHIP样蛋白2抗体包装5g
牛传染性胸膜肺炎PCR试剂盒晚期包膜蛋白2B抗体焦地黄苯乙甙B1 AG 490(Tyrphostin B42)
脂肪酶家庭成员K抗体焦性没食子(标准品) Ganoderic acid F
白血病相关蛋白18/癌蛋白18抗体绞股蓝(标准品) Ursodeoxycholic acid
无脑回的致病因LIS1抗体绞股蓝皂苷(标准品) Ursodeoxycholic acid
溶酶体相关膜蛋白3抗体绞股蓝皂苷A(标准品) Cefetamet pivoxil hydrochloride
亮氨脑啡肽抗体绞股蓝皂苷XLIX(标准品) Cefetamet pivoxil hydrochloride
自噬微管相关蛋白轻链3抗体节裂角茴香(标准品) L-Biopterin
指髌骨综合征相关蛋白NPS1抗体结石草(标准品) Wortmannin
自噬微管相关蛋白轻链β3抗体介芬 Neostigmine bromide
胚胎干相关蛋白FOPNL抗体IGFBP-4/IBP4/FITC 荧光素标记胰岛素样生长因子结合蛋白-4抗体IgG
磷酸化癌因FOS蛋白B抗体IGFBP-5/IBP5 /FITC 荧光素标记胰岛素样生长因子结合蛋白-5抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。