使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 肺炎支原体PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63639
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
N-阿魏酰真蛸英文名称: Acid Violet 49整联蛋白重复蛋白3抗体包装1g
N-苄基-(9Z,12Z)-十八碳二烯酰英文名称: Metanil yellow胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白1抗体包装5g
N-苄基-(9Z,12Z,15Z)-十八碳三烯酰英文名称: Orange G胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白2抗体包装1g
N-苄基十六烷酰英文名称: OrangeⅡ磷酸化整合素β4抗体包装250mg
N-反式-阿魏酰基酪英文名称: Chrysoidin胰岛素样生长因子结合蛋白1抗体包装5g
N-反式-对-香豆酰基去辛弗林英文名称: Sunset Yellow FCF胰岛素样生长因子结合蛋白4抗体包装1g
N-反式-对香豆酰酪(标准品)英文名称: Tartrazine整合素α7抗体包装5g
N-基野靛碱(标准品)英文名称: Acid Yellow 17白介素7抗体包装1g
Nudicaucin A英文名称: 5-TAMRA, SE白介素6受体α/IL-6Rα抗体包装1g
Nudicaucin B英文名称: Girard’s reagent T白介素9抗体包装1g
Odoratisol A英文名称: N-Benzoyl-N-phenylhydroxylamine整合素αL抗体Integrin αL包装250mg
Oleanolic acid-3-O-β-D-gluc...英文名称: Levosimendan干扰素α抗体包装5g
Peritassine A英文名称: Zincon磷酸化肌聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1抗体包装25g
Pinocembrin 7-O-(3''-galloy...英文名称: Dithizone磷酸化肌聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1抗体包装5g
Presapogenin CP4英文名称: MagnesonI抑制素βC抗体包装5MG
肺炎支原体PCR试剂盒微管相关蛋白4抗体青阳参苷元A(标准品) β-Carotene
26S蛋白酶调节亚型7抗体青阳参苷元B(标准品) Sesamoside
蛋白酪氨磷酶非受体型4抗体氢槟榔(标准品) Trigonelline Hydrochloride
脑肠肽O酰转移酶抗体氢东莨菪(标准品) Cucurbitacin B
转录调控因子MRG15抗体氢高乌素(标准品) Quercitrin
髓系/**混合谱系白血病蛋白5抗体苘麻子(标准品) Quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside
T**成熟相关蛋白抗体秋水仙(标准品) Xanthotol
二尿症cblA抗体曲克芦丁(标准品) Sophocarpine
非平滑肌肌球蛋白2A抗体驱虫斑鸠菊(标准品) Alismoxide
岩藻糖1磷酸鸟苷酰转移酶抗体IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、猪、牛、羊、犬白介素-1受体拮抗剂抗体IgG
外质蛋白FREM1抗体IL-1R I /FITC 荧光素标记白介素1受体Ⅰ抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。