PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 马立克氏病病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63646
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
白土苓(短柱肖菝契)(标准品)英文名称: DL-Mandelic acid磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗体包装1g
白土苓(华南肖菝葜)(标准品)英文名称: Ascorbic acid;vitamin C磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗体包装5g
白薇(标准品)英文名称: Ascorbic acid;vitamin C纤毛内转运同源蛋白46抗体包装100g
白鲜碱(标准品)英文名称: Octadecanamine白介素-10受体a抗体包装25g
白鲜皮(标准品)英文名称: Sorbic acid白介素-13受体a1抗体包装500g
白杨素(标准品)英文名称: Luliconazole相关鸟苷三磷酸酶基因抗体包装1g
白杨素-7-O-龙胆二糖苷英文名称: 5-Nitro-1,10-phenanthroline白介素-13受体a2抗体包装25g
白英(标准品)英文名称: Rotundic acid嗜酸粒趋化蛋白CCL1抗体包装5g
白芷(标准品)英文名称: Bromophenol blue sodium salt磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装1g
百部(对叶百部)(标准品)英文名称: Thymol blue sodium salt胰岛素降解酶抗体包装5g
百部(直立百部)(标准品)英文名称: Sodium tetraphenylboron白介素12抗体包装100ml
百合(标准品)英文名称: Sodium sulfosalicylate白介素4抗体包装25g
百两金素A(标准品)英文名称: Nitroso R Salt胰岛素样生长因子结合蛋白9抗体包装5g
百秋李(标准品)英文名称: Rhodizonic acid sodium salt干扰素-gamma受体2抗体包装10mg
百蕊草(标准品)英文名称: Indigo carmine白介素27受体抗体包装100mg
马立克氏病病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒维生素A抗体科罗索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat
蛋白聚糖Versican抗体科罗索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat
VWCE抗体可替宁 COTININE(RG)Human, Mouse, Rat
视神经视网膜相关蛋白VAX1抗体2-邻香豆 COUMARIC ACID, 2-(P)Human, Mouse, Rat
视神经视网膜相关蛋白VAX2抗体2-邻香豆 COUMARIC ACID, 2-(P)Human, Mouse
维生素D3受体抗体反-对香豆 COUMARIC ACID, TRANS-P-(P)Human, Mouse, Rat
B**前体蛋白1抗体反-对香豆 COUMARIC ACID, TRANS-P-(P)Human, Mouse
血管内皮粘附分子抗体芹菜素-7-葡萄糖苷 APIGENIN-7-O-GLUCOSIDE (COSMOSIIN)(P)Human
血管非炎性蛋白2抗体芹菜素-7-葡萄糖苷 APIGENIN-7-O-GLUCOSIDE (COSMOSIIN)(P)Human, Mouse
叉头蛋白O3A抗体IKK beta /FITC 荧光素标记核因子κB激酶beta抑制剂抗体IgG
卵泡相关蛋白1phospho-IKK gamma (Ser85) /FITC 荧光素标记磷酸化核因子κB激酶gamma抑制剂抗体IgG