使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: **通用染料法荧光定量PCR试剂盒 规格: 50次 货号:BH-P63660 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。 PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩��的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 大黄酸英文名称: Coniferyl alcohol磷酸化整合素连接激酶1抗体包装5g 大黄酸(标准品)英文名称: Acetyl coenzyme A sodium salt 磷酸化整合素连接激酶1抗体包装1g 大戟因子L1(标准品)英文名称: Disodium 5'-Inosinate磷酸化胰岛素受体底物1抗体包装25g 大蓟(标准品)英文名称: Ciclesonide磷酸化间粘附分子1抗体包装5g 大蓟苷(标准品)英文名称: Ciclesonide磷酸化整合素β3抗体包装25g 大麦芽碱(标准品)英文名称: L-Tyrosine amide磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装5g 大青叶(标准品)英文名称: saponin磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装100g 大蒜素,二烯基二硫英文名称: Norethindrone磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装25g 大血藤(标准品)英文名称: Norethindrone磷酸化整合素β3抗体包装500g 大叶骨碎朴(标准品)英文名称: Cortisone球蛋白A诱导同源蛋白抗体包装1g 大叶茜草素英文名称: Cortisone白介素2抗体包装25g 大叶茜草素英文名称: 2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamide白介素2抗体包装5g 大叶紫珠(标准品)英文名称: 2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamideDNA结合抑制因子4抗体包装1g 大枣(标准品)英文名称: Reboxetine mesylate胰岛素样生长因子2受体抗体包装25g 大皂角(标准品)英文名称: Ketanserin锌指蛋白Aiolos抗体包装5g **通用染料法荧光定量PCR试剂盒钨 无水硫化 无水亚硫 硒 溴化 亚铁 亚硝亚铁 一硫化 乙二氢 补体因子H抗体IL-6/FITC (mouse、rat) 荧光素标记白介素6抗体IgG 磷酸化Fas死亡结构域相关蛋白抗体IL-6/FITC 荧光素标记白介素6抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: **通用染料法荧光定量PCR试剂盒 规格: 50次 货号:BH-P63660 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩��的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 大黄酸英文名称: Coniferyl alcohol磷酸化整合素连接激酶1抗体包装5g
大黄酸(标准品)英文名称: Acetyl coenzyme A sodium salt 磷酸化整合素连接激酶1抗体包装1g
大戟因子L1(标准品)英文名称: Disodium 5'-Inosinate磷酸化胰岛素受体底物1抗体包装25g
大蓟(标准品)英文名称: Ciclesonide磷酸化间粘附分子1抗体包装5g
大蓟苷(标准品)英文名称: Ciclesonide磷酸化整合素β3抗体包装25g
大麦芽碱(标准品)英文名称: L-Tyrosine amide磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装5g
大青叶(标准品)英文名称: saponin磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装100g
大蒜素,二烯基二硫英文名称: Norethindrone磷酸化胰岛素样生长因子1受体抗体包装25g
大血藤(标准品)英文名称: Norethindrone磷酸化整合素β3抗体包装500g
大叶骨碎朴(标准品)英文名称: Cortisone球蛋白A诱导同源蛋白抗体包装1g
大叶茜草素英文名称: Cortisone白介素2抗体包装25g
大叶茜草素英文名称: 2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamide白介素2抗体包装5g
大叶紫珠(标准品)英文名称: 2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamideDNA结合抑制因子4抗体包装1g
大枣(标准品)英文名称: Reboxetine mesylate胰岛素样生长因子2受体抗体包装25g
大皂角(标准品)英文名称: Ketanserin锌指蛋白Aiolos抗体包装5g **通用染料法荧光定量PCR试剂盒钨
无水硫化
无水亚硫
硒
溴化
亚铁
亚硝亚铁
一硫化
乙二氢
补体因子H抗体IL-6/FITC (mouse、rat) 荧光素标记白介素6抗体IgG
磷酸化Fas死亡结构域相关蛋白抗体IL-6/FITC 荧光素标记白介素6抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。