PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 人副流感病毒2型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63677
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
谷胱甘肽(氧化型)标准品英文名称: VX-11e磷酸化Ras信号转导KSR1蛋白抗体包装25g
谷精草(标准品)英文名称: Alogliptin(SYR-322)酮抗体包装5g
骨碎补(标准品)英文名称: Curcumenol激肽释放酶7抗体包装1g
固公果根(标准品)英文名称: BYL-719激肽释放酶9抗体(舒血管素9)包装5g
瓜蒌(栝楼)(标准品)英文名称: BYL-719激肽释放酶14抗体包装1g
瓜蒌皮(双边栝楼(标准品)英文名称: A66电压阀门通道混合器相关亚家族成员7抗体包装5mg
瓜蒌皮(栝楼)(标准品)英文名称: SC514ATP敏感性通道亚基kir6.2抗体包装100ml
瓜子金(标准品)英文名称: γ-CyclodextrinTIP60抗体包装25g
瓜子金皂苷V英文名称: Me-β-CD组蛋白赖氨酸特异性脱基酶1抗体包装5g
瓜子金皂苷XXXI(对照品)英文名称: Epothilone B(EPO906, Patupilone) 转录因子GATA3结合蛋白G3B抗体包装1g
瓜子金皂苷己(标准品)英文名称: BMS345541磷酸化周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体包装5g
关白附(标准品)英文名称: IKK16磷酸化通道蛋白DRK1抗体包装25g
关黄柏(标准品)英文名称: Trelagliptin succinate;SYR-472离子通道蛋白Kv3.4抗体包装5g
管花苷A(标准品)英文名称: 2-[2-(2-t-Boc-aminoethoxy)ethoxy]ethanol 离子通道蛋白Kv3.3抗体包装1g
贯叶金丝桃(标准品)英文名称: 2’,2’-Difluoro-2’-deoxyuridine 组蛋白去基化酶JMJD2B抗体包装5g
人副流感病毒2型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒烯酰辅酶A水合酶含结构域蛋白2抗体D-阿拉伯糖(标准品) Iron granules
肿瘤坏死因子受体超家族成员EDAR抗体D-果糖(标准品) Iron(III) citrate
自身抗原EDC4抗体D-四氢药根(标准品) DL-Lactic acid
E3泛素蛋白连接酶EDD抗体D-松(标准品) DL-Lactic acid
胚胎外胚层发育蛋白EED抗体DL-薄荷(标准品) Ammonium citrate, tribasic
转录接头蛋白EP300抗体Euojaponine D CAS, Chrome azurol S
内皮脂肪酶抗体Eupeasaponin I Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt
MYC启动子结合蛋白1抗体Hederacolchiside A1(标准品) Cellulase
内质网蛋白29抗体Hederacolchiside E Pyronin Y
CD349抗体IL-17C/FITC 荧光素标记白介素-17C抗体IgG
FISH蛋白抗体IL-17D/IL-27/FITC 荧光素标记白介素-17D抗体IgG