使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 川贝母PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63688
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
黄芩素(标准品)英文名称: Sulbactam Acid长寿相关基因lASS5抗体包装5g
黄藤素英文名称: Arenobufagin长寿相关基因lASS3抗体包装5g
黄芫花(标准品)英文名称: Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864肿瘤转移抑制基因1抗体包装100g
黄杨碱(标准品)英文名称: Rupatadine fumarate长寿相关基因lASS4抗体包装25g
黄钟花醌;拉帕 (标准品)英文名称: Rupatadine fumarateRNA结合蛋白LIN28B抗体包装5g
灰毡毛忍冬皂苷英文名称: Musk ketoneRNA结合蛋白LIN28抗体包装1g
灰毡毛忍冬皂苷乙(标准品)英文名称: Midostaurin内皮脂肪酶抗体包装250mg
茴芹内酯(标准品)英文名称: 1,10 –Phenanthroline anhydrous抗原6G抗体包装100g
茴香脑英文名称: 1,10-Phenanthroline hydrate富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1抗体包装25g
茴香酸对羟基苯乙酯英文名称: 1,10-Phenanthroline hydrochloride monohydrate层粘连蛋白5(laminin γ2)抗体包装500g
火麻仁(标准品)英文名称: Carbetocin唾液过氧化物酶LPO抗体包装5g
火炭母(标准品)英文名称: Naringenin 溶菌酶抗体包装100g
鸡蛋花(标准品)英文名称: N(2),9-Diacetylguanine溶菌酶抗体包装25g
鸡冠花(标准品)英文名称: AlpinetinLAD1蛋白抗体包装5g
鸡内金(标准品)英文名称: Epothilone A胸腺**素LAP2抗体包装100g
川贝母PCR试剂盒纤维蛋白溶酶原抗体银杏黄标准品试剂盒 GINKGO FLAVONOIDS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse
DNA修复蛋白NBS1抗体银杏黄标准品试剂盒 GINKGO FLAVONOIDS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse
蛋白质精氨转移酶1抗体GENTIAN BITTERS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat
色素P450 1A2抗体FRAXINUS(ASH) STANDARDS KIT(RG)Human, Mouse, Rat
磷化磷酯酶Cγ1抗体亚麻籽标准品试剂盒 FLAX SEED STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat
磷化磷酯酶Cγ1抗体亚麻籽标准品试剂盒 FLAX SEED STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat
磷化磷酯酶Cγ1抗体葫芦巴皂苷标准品试剂盒 FENUGREEK SAPONINS STANDARDS KIT(P)Human
磷化丝/苏氨蛋白激酶Plk1抗体葫芦巴皂苷标准品试剂盒 FENUGREEK SAPONINS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse
磷化多聚合苷激酶3磷化酶抗体EYEBRIGHT STANDARDS KIT(SH)Human, Mouse
F-box蛋白9抗体IL-22R/IL22RA1/FITC 荧光素标记白介素-22受体抗体IgG
脂肪酰辅酶A还原酶1抗体IL-22BP/IL22RA2/FITC 荧光素标记白介素22受体结合蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。