使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 流感病毒N6亚型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63706
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特��性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
化矢车菊素,花青素(标准品)英文名称: 2’-OMe Cytidine肌球蛋白相互作用G蛋白交换因子抗体包装5g
化缬草素英文名称: ibu-rG珠蛋白1抗体包装1g
化血根碱(标准品)英文名称: Bz-rC间充质同源盒蛋白2抗体包装25g
轮环藤根(标准品)英文名称: Bz-rAG蛋白偶联受体MRGX1抗体包装5g
罗布麻宁;香草乙酮;夹竹桃麻素(标准品)英文名称: Ac-dC黑色素瘤相关抗原11抗体包装1g
罗布麻叶(标准品)英文名称: ibu-dGG蛋白偶联受体MAS相关蛋白抗体包装25g
罗汉果(标准品)英文名称: bz-dC麦芽糖结合蛋白抗体包装5g
罗汉果苷III(标准品)英文名称: bz-dA肌球蛋白XVIIIb抗体包装1g
罗汉果苷IV(标准品)英文名称: Trt-rUMAL蛋白抗体包装5g
罗汉果黄素英文名称: Trt-dU麦芽糖孔蛋白抗体包装100g
罗汉果皂苷Iva英文名称: Trt-dT蕈碱样蛋白3抗体包装25g
罗汉果皂苷Ive(标准品)英文名称: DMT-5-I-dU巨噬清道夫受体1抗体包装5g
罗汉果皂苷V(标准品)英文名称: DMT-2'-F-dU牛结核杆菌菌体蛋白抗体包装1g
罗汉果皂苷ⅡA2英文名称: DMT-2'-OMe-UT成熟相关蛋白抗体包装25g
罗汉果皂苷ⅢA1英文名称: 5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC黑色素瘤相关抗原D1抗体包装5g
流感病毒N6亚型检测试剂盒(荧光PCR法)腺病早期E1A蛋白抗体锁链素(Desmosine)检测试剂盒Desmosine ELISA Kit
磷化活化复制因子2抗体羧化不全骨钙素(ucOC)检测试剂盒ucOC ELISA Kit
磷化活化复制因子2抗体髓样细胞触发性受体2(TREM2)检测试剂盒TREM2 ELISA Kit
磷化失调症蛋白1抗体髓样分化因子88(MyD88)检测试剂盒MyD88 ELISA Kit
锚蛋白重复结构域蛋白17抗体髓鞘性蛋白(MBP)检测试剂盒MBP ELISA Kit
胞质乙脱氢酶1抗体髓磷脂性蛋白(MBP)检测试剂盒MBP ELISA Kit
ADP核糖化样因子ARL3抗体髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)检测试剂盒MPO-ANCA IgG ELISA Kit
花生四烯15脂氧合酶1抗体髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体(MPO-ANCA)检测试剂盒MPO-ANCA ELISA Kit
癌增强蛋白2抗体髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒MPO ELISA Kit
FAM172A蛋白抗体Integrin AlphaV Beta5/FITC 荧光素标记整合素αVβ5抗体IgG
磷酸化粘着斑激酶抗体Integrin Beta5/FITC 荧光素标记整合素β5抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。