使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 流感病毒N亚型核酸分型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63710
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的��度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
满山红(标准品)英文名称: Byakangelicol基质金属蛋白酶-17抗体包装25g
蔓荆子黄素(标准品)英文名称: Byakangelicin膜突蛋白抗体包装5g
芒果苷(标准品)英文名称: (−)-Bilobalide麻疹病融合蛋白抗体包装25g
芒果叶(标准品)英文名称: Peucedanol红膜蛋白55抗体包装5g
莽草酸(标准品)英文名称: Cyclopamine膜相关环指蛋白5抗体包装1g
猫爪草(标准品)英文名称: Betulin磷酸化肌增强因子2C抗体包装250mg
毛大丁草(标准品)英文名称: Betulin线粒体核糖体蛋白MRP63抗体包装5g
毛冬青(标准品)英文名称: Betulinaldehyde磷酸化肌增强因子2C抗体包装1g
毛冬青皂苷A英文名称: Betulinic acid基质金属蛋白酶13抗体包装25g
毛萼结晶;毛萼晶A英文名称: Betulinic acid酪氨酸单氧化酶微管相关蛋白MICAL抗体包装5g
毛萼乙素英文名称: Dimethylfraxetin梅克尔-格鲁伯综合征相关蛋白抗体包装25g
毛钩藤碱英文名称: Atractylenolide I突变的黑色素瘤相关抗原1抗体包装5g
毛诃子(标准品)英文名称: Atractylenolide III黑色素瘤相关抗原10抗体包装1g
毛花苷C英文名称: Anemoside B4丝裂原活化蛋白激酶激酶2抗体包装25g
毛兰素(标准品)英文名称: Patchouli alcoholG蛋白偶联受体24抗体包装5g
流感病毒N亚型核酸分型检测试剂盒(荧光PCR法)腺苷活化蛋白激酶γ3抗体可溶性核因子κB受体活化因子配(sRANKL)检测试剂盒sRANKL ELISA Kit
腺苷单磷活化蛋白激酶β2抗体可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)检测试剂盒sTLR9/sCD289 ELISA Kit
磷化周期末期促进复合蛋白APC1抗体可溶性Toll样受体4(sTLR4)检测试剂盒sTLR4 ELISA Kit
周期末期促进复合蛋白APC1抗体可溶性Toll样受体2(sTLR2)检测试剂盒sTLR2 ELISA Kit
磷化蛋白激酶B2抗体可溶性P选择素(sP-selectin)检测试剂盒sP-selectin ELISA Kit
磷化铁蛋白Fe65抗体可溶性Endoglin(ENG/sCD105)检测试剂盒ENG/sCD105 ELISA Kit
磷化铁蛋白Fe65抗体可溶性CD86(B7-2/sCD86)检测试剂盒B7-2/sCD86 ELISA Kit
磷化APP淀粉样肽前体蛋白抗体可溶性CD40配体(sCD40L)检测试剂盒sCD40L ELISA Kit
磷化APP淀粉样肽前体蛋白抗体可溶性CD30配体(sCD30L)检测试剂盒sCD30L ELISA Kit
磷酸化叉头蛋白3A抗体IRF-1/FITC 荧光素标记干扰素调节因子抗体IgG
磷酸化叉头蛋白3A抗体IRF3 /FITC 荧光素标记干扰素调节因子3抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。