使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 甲3亚型流感病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63712
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实���及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
蒙花苷(标准品)英文名称: DL-Menthol粘蛋白15抗体包装1g
迷迭香酸(标准品)英文名称: Menthol基质金属蛋白酶22抗体包装5g
密蒙花(标准品)英文名称: Psoralidin肺癌转移相关蛋白抗体包装5g
蜜环菌粉(标准品)英文名称: Bavachin候选肿瘤抑制基因MARVELD1抗体包装100mg
绵萆薢(标准品)英文名称: Bakuchiol成熟T增殖蛋白1抗体包装500mg
绵大戟(标准品)英文名称: Corylin丝裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1抗体包装1g
绵马贯众(标准品)英文名称: Psoralen肌球蛋白轻链6抗体包装25g
绵马贯众素ABBA(标准品)英文名称: Atractylodin磷酸化肌增强因子2C抗体包装5g
绵马酸ABA(标准品)英文名称: Bulleyaconitine A磷酸化黑色素瘤粘附分子CD146抗体包装1g
棉花根(标准品)英文名称: Herbacetin肌增强因子2C抗体包装100g
棉子糖(标准品)英文名称: Fraxinellone促黑γ1抗体包装25g
明党参(标准品)英文名称: Theaflavin小鼠抗酮酸激酶-M2抗体包装5g
莫诺苷(标准品)英文名称: Theaflavin-3'-gallate基化多聚腺苷酸结合蛋白抗体包装1g
墨旱莲(标准品)英文名称: Theaflavin-3-gallate有丝分裂原诱导基因6抗体包装25g
母丁香(标准品)英文名称: Saikosaponin A线粒体融合蛋白Mfn2抗体包装5g
甲3亚型流感病毒检测试剂盒(荧光PCR法)腺苷激酶2抗体妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)检测试剂盒PAPP-A ELISA Kit
顶体前体蛋白抗体热休克因子1(HSF1)检测试剂盒HSF1 ELISA Kit
黑色素瘤缺失样蛋白1抗体热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)检测试剂盒HSP gp96 ELISA Kit
未知糖化转移酶AER61抗体热休克蛋白90(HSP-90)检测试剂盒HSP-90 ELISA Kit
铁蛋白Fe65抗体热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒HSP-70 ELISA Kit
抑癌因ras同源家族1抗体热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒Hsp-60 ELISA Kit
转录激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗体热休克蛋白40(Hsp-40)检测试剂盒Hsp-40 ELISA Kit
心钠素抗体热休克蛋白27(HSP-27)检测试剂盒HSP-27 ELISA Kit
氨酰tRNA合成酶2抗体热休克蛋白20(Hsp-20)检测试剂盒Hsp-20 ELISA Kit
磷酸化叉头蛋白家族1抗体IRF7 /FITC 荧光素标记干扰素调节因子7抗体IgG
叉头蛋白O4抗体Phospho-IRF7 (Ser471/472) /FITC 荧光素标记磷酸化干扰素调节因子7抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。