使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 禽流感病毒H5N8亚型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63732
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则���。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
山柰酚-3-O-芸香糖苷(标准品)英文名称: Notopterolmyocardin相关转录因子抗体包装25g
山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷英文名称: 10-Hydroxydecanoic acid金属应答元件结合转录因子-1抗体包装500g
山香圆叶(标准品)英文名称: Hydroxysafflor yellow A丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体包装5g
山药(标准品)英文名称: Aristolochic Acid Ia磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体包装500mg
山银花(灰毡毛忍冬)(标准品)英文名称: Madecassoside磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体包装25g
山楂(山里红)(标准品)英文名称: Madecassic acid促进调解蛋白家族2A抗体包装5g
山楂(山楂)(标准品)英文名称: Madecassic acid黑色素瘤抑制活性蛋白2抗体包装1g
山楂酸,马斯里酸(标准品)英文名称: Hecogenin肿瘤转移抑制蛋白1包装25g
山楂叶(山里红)(标准品)英文名称: Ganoderic acid B肌球蛋白轻链激酶抗体包装5g
山芝麻(标准品)英文名称: IsoschaftosideMYCBPAP抗体包装1g
山栀苷酯(标准品)英文名称: Carbamyl-β-methylcholine chloride 组织相容性复合体蛋白1抗体包装5g
山茱萸(标准品)英文名称: Solanesol线粒体核糖体蛋白S22抗体包装250mg
山茱萸新苷I英文名称: Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside棕榈酰化膜蛋白7抗体包装1g
珊瑚菜内酯,珊瑚菜素(标准品)英文名称: Fraxin小鼠抗单克隆抗体包装5g
珊瑚姜(标准品)英文名称: Esculin肌球蛋白轻链1/3抗体包装1g
禽流感病毒H5N8亚型检测试剂盒(荧光PCR法)小鼠儿茶酚百蕊草(标准品)Human, Mouse, Rat
人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体百蕊草素I/山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷/阿福豆苷(标准...Human, Mouse
大鼠组织因子柏子仁(标准品)Human, Mouse
人抗环胍氨肽抗体败酱草(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠白介素27斑蝥素(标准品)Human, Mouse
大鼠维生素D板蓝根(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠白介素23半边莲(标准品)Human, Mouse, Rat
人抗核周因子抗体半甘草异黄BHuman, Mouse
大鼠维生素K1半夏(标准品)Human, Mouse, Rat
FAS凋亡抑制分子1抗体phospho-Syndecan 4/FITC 荧光素标记抗磷酸化多配体聚糖4抗体IgG
FAS凋亡抑制分子2KGFR/FGFR2/RBITC 红色罗丹明标记角质形成生长因子受体/成纤维生长因子受体2抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。