使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 禽流感病毒H10N8亚型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63740
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基���对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
天花粉(栝楼)(标准品)英文名称: Linderane磷酸化氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体包装250mg
天麻(标准品)英文名称: D(+)-Glucose磷酸化氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体包装1g
天麻素(标准品)英文名称: Rutaecarpine肝生长因子受体抗体包装5g
天名精(标准品)英文名称: Rutaecarpine磷酸化丝裂原活化蛋白激酶3K9抗体包装5MG
天南星(标准品)英文名称: Evodiamine受体酪氨酸激酶抗体包装1g
天山雪莲 (标准品)英文名称: Evodiamine丝裂原活化蛋白激酶3K9抗体包装5g
天仙藤(标准品)英文名称: Schisandrin C黑素皮质素3受体抗体包装1g
甜菜碱(标准品)英文名称: Schisandrol AMenin抑癌蛋白抗体包装5g
甜茶(标准品)英文名称: Schisandrol B错配修复蛋白3抗体包装25g
甜茶苷;甜叶悬钩子苷(标准品)英文名称: Schizandrin A微小染色体维持缺陷蛋白7抗体包装5g
甜橙黄酮(标准品)英文名称: Schizandrin B单核趋化蛋白2抗体(小鼠)包装25g
甜瓜蒂(标准品)英文名称: Schisantherin A单核趋化蛋白3抗体包装5g
甜菊苷(标准品)英文名称: Sipeimine单核趋化蛋白3抗体包装1g
甜叶菊(标准品)英文名称: Crocin巨噬炎症蛋白18抗体包装1g
铁冬青酸;毛冬青酸(标准品)英文名称: Crocin IMITF相关转录因子抗体包装250mg
禽流感病毒H10N8亚型检测试剂盒(荧光PCR法)小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体胡黄连苷 II(标准品)Human, Mouse
人胸表达趋化因子胡黄连苷 III(标准品)Human
人B-**趋化因子胡黄连苷IVHuman
小鼠磷脂酰丝氨胡黄连苷I(标准品)Human, Mouse, Rat
兔子转化生长因子β胡椒(白胡椒)(标准品)Human, Mouse, Rat
鱼促上腺皮质**胡椒(黑胡椒)(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠可溶性凋亡相关因子胡椒(标准品)Human, Mouse, Rat
人膜粘连蛋白 Ⅱ ELISA 试剂盒胡萝卜苷(标准品)Human, Mouse
小鼠胆磷甘油酯胡麻属苷(标准品)Human, Mouse
肌侧索硬化症相关蛋白FGGY抗体KLF13/RFLAT-1 /FITC 荧光素标记肠道内富含的Kruppel样因子13抗体IgG
肌侧索硬化症相关蛋白FIG4抗体KLK1/FITC 荧光素标记激肽释放酶1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。