使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 禽流感病毒H5亚型检测试剂盒 (荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63742
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就��保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
土贝母苷乙英文名称: Arbutin组织相关抗原HLA-B15抗体包装25g
土鳖虫(地鳖)(标准品)英文名称: Sanguinarine chloride蛋氨酸腺苷转移酶抗体包装5g
土鳖虫(冀地鳖)(标准品)英文名称: Secoisolariciresinol Diglucoside磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶p38β抗体包装100ml
土大黄(标准品)英文名称: Aminomalonic acid 磷酸化自噬微管相关蛋白轻链3抗体包装25ml
土大黄苷(标准品)英文名称: AZD-4547粘蛋白-5B抗体包装5g
土茯苓(标准品)英文名称: Zineb粘蛋白-3抗体包装1g
土槿皮(标准品)英文名称: Wilforine鸡马立克氏病火鸡疱疹病抗体包装1g
土荆芥(标准品)英文名称: Neogambogic acid多药耐药蛋白/P-糖蛋白抗体(C端)包装5g
土荆皮(松)(标准品)英文名称: Diosgenin glucoside硝唑抗体包装25g
土荆皮酸(标准品)英文名称: N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine黑色素瘤相关抗原4抗体包装5g
土荆皮乙酸(标准品)英文名称: Bergenin钙结合蛋白39抗体包装10g
土垄大白蚁巢(标准品)英文名称: Bergenin线粒体抗病信号MAVS蛋白抗体包装50g
土木香(标准品)英文名称: Palmatine hydrochloride巨噬集落激因子受体抗体包装1g
土木香内酯(标准品)英文名称: Palmatine hydrochloride肿瘤转移相关蛋白1抗体包装25g
土牛膝(标准品)英文名称: Phellodendrine chloride粘蛋白4抗体包装5g
禽流感病毒H5亚型检测试剂盒 (荧光PCR法)小鼠抗人红单克隆抗体小白菊提取物#1 Feverfew (Tanacetum parthenium) Aerial Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
视黄受体应答蛋白2抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
抗Rap1A抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
RAS癌因相关蛋白RAB7抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)Human
c-Myc应答蛋白抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse
RAS癌因相关蛋白RAB6B抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体Pau d'arco (Tabebuia impetiginosa) Bark Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
结肠癌相关因蛋白抗体(resistin-like β)罗汉果提取物#6 Luo han guo (Siraitia grosvenori) Fruit Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
磷化原癌因c-Met相关酪氨激酶抗体罗汉果提取物#5 Luo han guo (Siraitia grosvenori) Fruit Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)Human
兜蛋白抗体KLK7/FITC 荧光素标记激肽释放酶7抗体IgG
脂肪堆积和肥胖相关蛋白抗体KLK9/FITC 荧光素标记激肽释放酶9抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。