使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 呼吸道合胞病毒B型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63765
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的���异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
柚皮素(标准品)英文名称: 1,8-Dihydroxyanthraquinone胚胎干关键蛋白抗体包装25ml
右旋蛇菰宁英文名称: Chlorhexidine hydrochloride核小体组装蛋白1抗体包装500ml
右旋延胡索乙素(标准品)英文名称: Methoxyphenamine HClN-钙粘附分子抗体包装100g
幼枝含断氧化马钱子甙(标准品)英文名称: Potassium guaiacolsulfonate hemihydrate核受体辅助抑制因子1抗体包装25g
余甘子(标准品)英文名称: Propyl gallate肾小球粘附分子受体抗体包装100g
鱼腥草(标准品)英文名称: Chlormezanone巢蛋白/神经上皮干蛋白抗体包装25g
羽扇豆(标准品)英文名称: Calcium hydrogenphosphate dihydrate巢蛋白/神经上皮干蛋白抗体包装5g
羽扇豆鹼(标准品)英文名称: Sulfamethazine蛋白激酶锚定蛋白抗体包装1g
玉米须(标准品)英文名称: Sulfaguanidine丝氨酸或半胱氨酸蛋白解酶抑制蛋白1抗体包装5g
玉叶金花(标准品)英文名称: Fenbufen黑色素瘤硫酸软骨素蛋白多糖抗体包装100ml
郁金(温郁金)(标准品)英文名称: Troxerutin突触粘附分子3抗体包装100g
预知子(三叶木通)(标准品)英文名称: Diprophylline跨膜硫酸软骨素蛋白聚糖C抗体包装25g
愈创木素英文名称: Bendazol hydrochloride神经肿瘤Nova1抗原抗体包装500g
鸢尾苷(标准品)英文名称: Chloroquine diphosphateB链接激活蛋白抗体包装1g
鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷英文名称: Promethazine Hydrochloride中性鞘磷脂2抗体包装250mg
呼吸道合胞病毒B型检测试剂盒(荧光PCR法)小鼠溶菌酶龙胆(坚龙胆)(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠甘油三酯龙胆(龙胆)(标准品)Human, Mouse
人含缬酪肽蛋白龙胆花(标准品)Human, Mouse, Rat
人可溶性CD28龙胆苦苷(标准品)Human, Mouse
兔载脂蛋白B100龙胆;2,5-二羟苯(标准品)Human, Mouse
植物维生素K1龙脷叶(标准品)Human, Mouse
大鼠低密度脂蛋白龙脑(标准品)Human
小鼠β连环蛋白/联蛋白植提标准品Human
小鼠垂体腺苷环化酶激活肽龙血竭(标准品)Human, Mouse, Rat
FbxW2蛋白抗体lamin A/FITC 荧光素标记核纤层蛋白A抗体IgG
Fbxw7蛋白抗体Laminin Beta1/FITC 荧光素标记层粘连蛋白β1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。