使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 麻疹病毒和风疹病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63774
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是���循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量150-190万)英文名称: Candesartan cilexetilNOC2家族样蛋白抗体包装5g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量16-28万)英文名称: Tamsulosin hydrochloride 硝基酪氨酸抗体包装25mg
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量190-240万)英文名称: N-(3-Chloro-ortho-tolyl) anthranilic acid核蛋白p8抗体包装1g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量28-42万)英文名称: Mecobalamin神经特异性蛋白2抗体包装5g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量3-6万)英文名称: Vincetoxicoside B还原型辅酶Ⅱ氧化酶5/烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸抗体包装2g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量42-57万)英文名称: Isosorbide 5-mononitrate核干因子抗体(鸟嘌呤核苷酸结合蛋白3)包装1g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量57-73万)英文名称: Isosorbide 5-mononitrate尼曼匹克C1前体蛋白抗体包装5g
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量6-9.5万)英文名称: Isosorbide 2-nitrate去肾上腺素转运蛋白/神经递质去肾上腺素转运体抗体包装100ml
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量73-109万)英文名称: XX核孔复合体蛋白88抗体包装25ml
端羟基外消旋聚乳酸(重均分子量9.5-16万)英文名称: Enalaprilat核仁蛋白8抗体包装100g
端羟基右旋聚乳酸(重均分子量0.3-1.5万)英文名称: Bisoprolol fumarateNCK衔接蛋白2抗体包装25g
端羟基右旋聚乳酸(重均分子量1.5-3万)英文名称: Amlodipine maleate肾小球裂孔膜蛋白PDCN抗体包装5g
端羟基右旋聚乳酸(重均分子量102-137万)英文名称: Amlodipine maleate豆蔻酰基转移酶1抗体包装100ml
端羟基右旋聚乳酸(重均分子量137-170万)英文名称: Diflunisal利钠肽受体A抗体包装25ml
端羟基右旋聚乳酸(重均分子量17-26万)英文名称: Ganoderol B神经调节蛋白3抗体包装100g
麻疹病毒和风疹病毒检测试剂盒(荧光PCR法)小鼠血管活性肠肽五味子素(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠内素五味子Human, Mouse, Rat
大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ五味子烯(标准品)Human, Mouse
小鼠状腺过氧化物酶五味子乙素(标准品)Human, Mouse, Rat
人癌胚铁蛋白五味子酯(标准品)Human, Mouse
小鼠αL岩藻糖苷酶五味子酯戊Human, Mouse, Rat
大鼠环孢素A五味子酯乙(标准品)Human
人鳞状癌相关抗原五脂素A1Human, Mouse, Rat
大鼠超敏C反应蛋白五指柑(标准品)Human, Rat
岩藻糖变旋酶抗体Layilin/FITC 荧光素标记透明质酸受体抗体IgG
X三体综合征相关蛋白FUNDC1抗体LCAT/FITC 荧光素标记卵磷胆固酰转移酶抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。