使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 肺炎支原体和肺炎衣原体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63783
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酯封端聚乳酸(重均分子量137-170万)英文名称: Nordihydrocapsaicin抑瘤素M抗体包装5g
酯封端聚乳酸(重均分子量17-26万)英文名称: 4-(Methylamino)-antipyrine抑瘤素M受体抗体包装25g
酯封端聚乳酸(重均分子量170-206万)英文名称: Hydrazine sulfate锌指蛋白339抗体包装5g
酯封端聚乳酸(重均分子量206-288万)英文名称: Hydrazine sulfate氧气调节蛋白150抗体包装1g
酯封端聚乳酸(重均分子量26-36万)英文名称: Cyclandelate氧化应激反应蛋白1抗体包装1g
酯封端聚乳酸(重均分子量3-5.5万)英文名称: Nitrilotriacetic acid固生蛋白M抗体包装5g
酯封端聚乳酸(重均分子量36-48万)英文名称: 1,3- Propylene Glycol末端多聚腺苷酸1蛋白抗体包装1g
酯封端聚乳酸(重均分子量48-73万)英文名称: Diethylene Glycol嗅球蛋白3抗体包装5g
酯封端聚乳酸(重均分子量5.5-9 万)英文名称: Chlorothiazide转录因子OTX1抗体包装1g
酯封端聚乳酸(重均分子量73-102万)英文名称: 4-amino-6-chloro-1,3-benzenedisulfonamide转录因子OTX2抗体包装1g
酯封端聚乳酸(重均分子量9-17万)英文名称: Alkene转录因子OTX1+OTX2抗体包装250mg
(3R,4R)-N,4-二基-1-(苯基)-3-...英文名称: N-Methylparoxetine增食欲素B/欲B包装5g
(R)-1-氨基-3-基丁基酸蒎烷二酯盐酸盐英文名称: Sevoflurane鸟氨酸脱羧酶抗体包装100mg
1,2-二基-5-羟基-3-吲哚酸乙酯;美卡比酯;英文名称: DiaveridineO位N-乙酰葡萄糖OGT抗体包装25mg
1,9-吡唑并蒽酮;SP600125英文名称: Mestanolone少突胶质转录因子1包装25g
肺炎支原体和肺炎衣原体检测试剂盒(荧光PCR法)小鼠组蛋白H2b异莲心(标准品)Human
大鼠激酶M2型同工酶异绿原A(标准品)Human, Mouse, Rat
人抑瘤素M异绿原B(标准品)Human
小鼠血管内皮粘附分子1异绿原C(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠糖皮质类固受体异罗汉果皂苷 VHuman, Mouse, Rat
人肺表面活性物质相关蛋白D异芒果苷(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠γ氨丁异牡荆素(标准品)Human, Mouse
小鼠黄体**素释放**异南五味子木脂宁Human, Mouse, Rat
大鼠5羟色异欧前胡素(标准品)Human, Mouse, Rat
G蛋白偶联受体γ3抗体Leptin/FITC 荧光素标记瘦素抗体IgG
G蛋白偶联受体γ7抗体Leptin/FITC 荧光素FITC标记瘦素抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。