PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 流感嗜血杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63785
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
SEA-0400英文名称: Benzaldehyde包装100g
TTNPB (Arotinoid Acid)英文名称: Cavidine一种肿瘤抑制基因抗体(C端)包装25g
Zosuquidar;LY335979英文名称: Serotonin hydrochloride 血小板活化因子受体抗体包装5g
阿苯达唑英文名称: Evening primrose oil蛋白磷酸酶γ1抗体包装100g
阿达帕林英文名称: Loureirin A 核苷酸还原酶M2B抗体包装500g
阿尔法骨化英文名称: FRIEDELIN磷酸二酯酶4A抗体包装100g
阿戈美拉汀(II型)英文名称: FRIEDELAN-3BETA-OL丝束蛋白T Plastin抗体包装25g
阿戈美拉汀(I型)英文名称: (4S)-2α,3β-Dihydroxy-D:C-friedo-B':A'-neogammacer-9(11)-en-23-oic acid神经丛蛋白A2抗体包装100g
阿立哌唑英文名称: Pyrogallol网蛋白抗体包装25g
阿利苯多英文名称: N-NONADECANE 前列腺肿瘤高表达蛋白1抗体包装1g
阿利克仑-5英文名称: N-PENTADECANE磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体包装5g
阿仑磷酸钠英文名称: ETHYL CAFFEATE嘌呤ATP受体抗体包装1g
阿莫曲普坦苹果酸盐英文名称: Citric acid磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38抗体包装25g
阿尼西坦,回拉西坦;茴拉西坦英文名称: Citric acid果胶酶抑制蛋白18抗体包装5g
阿哌沙班英文名称: Potassium sulfate α型-过氧化酶活化增生受体抗体(PPAR α, PPAR-α)包装25g
流感嗜血杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)锌指FYVE结构域蛋白27抗体脑二磷胆 CYTIDINE-5'-DIPHOSPHOCHOLINE(P)Human, Mouse, Rat
受精卵抑制蛋白1抗体脑二磷胆 CYTIDINE-5'-DIPHOSPHOCHOLINE(P)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白471抗体豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
γ-氨丁A受体相关膜蛋白3豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
锌指蛋白909抗体豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
锌指蛋白420抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human
周期蛋白1结合蛋白抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human, Mouse
锌指蛋白318抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human
锌指蛋白281抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human, Mouse
G蛋白α抑制剂抗体Leptin receptor(long)/FITC 荧光素标记瘦素受体抗体(长)IgG
G蛋白受体α x+z抗体LFABP/FABP-1 /FITC 荧光素标记肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体IgG