使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 军团菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63790
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
度米芬英文名称: Picfeltarraenin X腺苷单磷酸活化蛋白激酶γ2抗体包装25g
对磺酰苯酸;4-羧基苯磺酰英文名称: Stigmasterol glucoside血小板衍化生长因子β抗体包装5g
多索茶碱英文名称: Neamine 血小板衍化生长因子γ抗体包装1g
厄多司坦英文名称: RIFAMPIN QUINONE 血小板47蛋白抗体包装5g
恶喹二酮英文名称: Rifamycin相关血浆蛋白A2抗体包装100g
二尼柳英文名称: 7-ADCA血浆谷氨酸羧肽酶抗体包装25g
二硫化四乙基秋兰姆英文名称: Piperacillin磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体包装250ml
伐地考昔英文名称: Piperacillin**蒙蛋白抗体包装100g
法莫替丁英文名称: Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate癌易感基因相关蛋白2包装25g
反苯环盐酸盐;单氧化酶(MAO)抑制剂英文名称: Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate细小清蛋白抗体包装1g
非布索坦英文名称: Bleomycin A5 Hydrochloride 红磷脂酰肌聚糖A抗体包装100g
非那西丁英文名称: Erythromycin ethylsuccinate原钙粘蛋白11抗体包装25g
非诺洛芬钙英文名称: GriseofulvinP选择素糖蛋白配体1抗体包装500g
芬苯达唑;苯硫咪唑英文名称: Tivantinib, ARQ 197蛋白激酶N2抗体包装100g
芬布芬英文名称: Ethyl vanillinG蛋白偶合受体激酶2抗体包装25g
军团菌检测试剂盒(荧光PCR法)锌指蛋白354C抗体大豆素 DAIDZEIN(AS)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白312抗体大豆素 DAIDZEIN(AS)Human
锌指脂蛋白抗体大豆素 DAIDZEIN(AS)Human, Mouse, Rat
锌指脂蛋白-1c抗体大豆素 DAIDZEIN(AS)Human
锌指蛋白ZIC5抗体硅藻黄色 DIADINOXANTHIN(SH)Human, Mouse
AN1型锌指蛋白5抗体胞苷 5'-磷二钠盐 CYTIDINE-5'-MONOPHOSPHATE DISODIUM SALT(SH)Human
胎蛋白调节蛋白1抗体胞苷 5'-单磷 CYTIDINE-5'-MONOPHOSPHATE(P)Human
凋亡调控蛋白ZDHHC16抗体胞苷 5'-单磷 CYTIDINE-5'-MONOPHOSPHATE(P)Human, Mouse
锌指蛋白754抗体胞啶 3'-单磷 CYTIDINE-3'-MONOPHOSPHATE(AS)Human, Mouse
G蛋白偶联受体TAS1R1蛋白抗体LHRH/GNRH /FITC 荧光素标记黄体**释放**抗体/促性腺**释放**抗体IgG
G蛋白偶联受体TGR7蛋白抗体LI-cadherin/FITC 荧光素标记肝肠钙粘连蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。