使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 副百日咳杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63796
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使��应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
磷酸伯安喹;磷酸伯氨喹英文名称: Galanin, rat重组猪乙脑病结构蛋白抗体包装5g
磷酸喹,喹二磷酸盐英文名称: Galanin (1-13)-Neuropeptide Y(25-36), amide (M32)磷酸羟戊酸激酶抗体包装1g
硫普罗宁,N-(2-巯基酰)甘氨酸英文名称: Galanin Message Associated Peptide (1-41), amide; Preprogalanin(65-105), amidePhocein蛋白抗体包装25g
硫酸阿托品/硫酸DL-莨菪碱英文名称: Gastrin I (1-14) (human)蛋白酶体PSMα4/20S Proteasome α4抗体包装5g
硫酸茚地那韦英文名称: Gastrin Releasing Peptide,human朊病/感染性蛋白抗体包装1g
柳氮磺吡啶英文名称: Gastrin Releasing Peptide,procine4-磷酸磷脂酰肌5激酶1样蛋白抗体包装500ml
卢比前列腺素/卢比前列酮英文名称: Gastrin Releasing Peptide-Lys(Biotin), human磷酸化磷脂酰肌激酶PIK3-γ抗体包装5g
苯吩;法齐明英文名称: Ghrelin (human)B白血病前体蛋白转录因子1抗体包装25g
氮平英文名称: GHRF, ratB白血病前体蛋白转录因子2抗体包装5g
磺隆英文名称: GHRF (1-44), humanB白血病前体蛋白转录因子4抗体包装25g
雷他定英文名称: GHRP-2PUM2蛋白抗体包装5g
美噻唑英文名称: GLP-2 (1-34) (human)多调制因子结合蛋白1抗体包装5g
诺昔康英文名称: Glucagon (1 - 29), bovine,human, porcineB白血病前体蛋白转录因子3抗体包装1g
普噻吨英文名称: Glucagon (19 - 29), bovine,human, porcine植烷酸氧化酶抗体包装100g
前列钠(DL型)英文名称: Glucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human蛋白二硫键异构酶P4HB抗体包装25g
副百日咳杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)锌指蛋白ZBTB7C抗体DEHYDROEPIANDOSTERONE, 3-ACETYL-7-OXO-(P)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白ZBTB8A抗体DEHYDRODICONIFERYL ALCOHOL 4-O-BETA-GLUCOPYRANOSIDE(SH)Human
锌指蛋白916B抗体去氢木香内酯 DEHYDROCOSTUS LACTONE(RG)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白903抗体去氢木香内酯 DEHYDROCOSTUS LACTONE(RG)Human
锌指蛋白923抗体去氢胆 DEHYDROCHOLIC ACID(RG)Human
锌指蛋白288抗体DEGALACTOTIGONIN(RG)Human, Mouse
锌指蛋白185抗体去氢抗坏血 DEHYDROASCORBIC ACID(RG)Human
锌指蛋白431抗体γ-位癸内酯 DECALACTONE, gamma-(SG)Human, Mouse
锌指蛋白379抗体δ-丁位癸内酯 DECALACTONE, DELTA-(SG)Human, Mouse, Rat
G蛋白偶联受体GPR125蛋白抗体LIX1/FITC 荧光素标记LIX1抗体IgG
G蛋白偶联受体RTA蛋白抗体LKB1/FITC 荧光素标记一种抑癌因IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。