PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 耶氏肺孢子虫检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63798
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
马来酸阿扎他啶英文名称: LHRH (4-10)磷酸变位酶1抗体包装1g
马来酸非尼拉敏英文名称: Lymphocyte Activating Pentapeptide磷酸激酶1抗体包装5g
马来酸吡汀英文名称: Melittin(Mellitin)酮酸羧化酶抗体包装1g
马来酸伏沙明英文名称: Metamorphosin A酮酸脱氢酶复合物X蛋白抗体包装5g
马来酸苯那敏/扑尔敏英文名称: Neo-Kyotorphin磷酸烯酮酸羧激酶抗体包装100g
马来酸溴苯那敏英文名称: Neurokinin A (4-10)果糖-2,6-二磷酸酶1抗体包装25g
吗贝英文名称: Neuropeptide W-30 (human)磷酸化6磷酸果糖激酶抗体包装1g
美芬诺酮英文名称: Neuropeptide W-30 (rat)p21蛋白抗体包装5g
美索巴莫英文名称: Neurotensin (1-8)P选择素糖蛋白配体1抗体包装25g
孟鲁司特钠英文名称: Neuropeptide Y (13-36)(porcine)丝氨酸蛋白酶2抗体包装5g
米尔贝肟英文名称: Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)蛋白酶调解因子10抗体包装10g
米拉贝隆英文名称: Neuropeptide Y (22-36)香叶烯基转移酶1β抗体包装1g
米屈肼英文名称: Neuropeptide Y (3-36)(porcine)胞浆蛋白LCP1抗体包装100g
莫吉司坦英文名称: Osteocalcin (7-19) (human)黑色素瘤优先表达抗原抗体包装25g
奈福泮/盐酸平痛新英文名称: Osteogenic Growth Peptide原钙粘蛋白γA6抗体包装5g
耶氏肺孢子虫检测试剂盒(荧光PCR法)锌指转录因子Slug抗体7-表三尖杉宁 CEPHALOMANNINE, 7-EPI-(P)Human, Mouse
胚胎干抑制蛋白Suz12抗体7-表三尖杉宁 CEPHALOMANNINE, 7-EPI-(P)Human
神经突触素1抗体7-表三尖杉宁 CEPHALOMANNINE, 7-EPI-(P)Human
磷化神经突触素1抗体2',3'-二氢三尖杉宁 DIHYDROCEPHALOMANNINE, 2',3'-(P)Human
磷化神经突触素1抗体2',3'-二氢三尖杉宁 DIHYDROCEPHALOMANNINE, 2',3'-(P)Human, Mouse
酪氨蛋白激酶Fyn(同步原癌因)抗体2',3'-二氢三尖杉宁 DIHYDROCEPHALOMANNINE, 2',3'-(P)Human, Mouse
顶端体相关蛋白7抗体DIHYDROCARVYLACETATE, (+)-(SG)Human
血清应答因子结合蛋白1抗体(-)-乙二氢葛缕酯 DIHYDROCARVYLACETATE, (-)-(RG)Human, Mouse
磷化血清应答因子抗体(-)-乙二氢葛缕酯 DIHYDROCARVYLACETATE, (-)-(RG)Human, Mouse, Rat
G蛋白偶联受体GPR86蛋白抗体Phospho-LKB1 (Thr189) /FITC 荧光素标记磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体IgG
G蛋白偶联受体HM74蛋白抗体LN /FITC 荧光素标记层粘连蛋白抗体IgG