PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 皮疽诺卡菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63806
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA���合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
盐酸帕他莫英文名称: Potassium hydrogen tartrate磷酯酶Cβ2抗体包装1g
盐酸哌维林英文名称: Potassium O-ethyl xanthate硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ/巯基抗氧化蛋白抗体包装250mg
盐酸布比卡因英文名称: Potassium oleate磷脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗体包装5g
盐酸达泊西汀(混旋)英文名称: Potassium phosphate, dibasic, trihydrate磷脂酸磷酸酶2结构域3抗体包装100g
盐酸达泊西汀(右旋)英文名称: Potassium phosphate, tribasic trihydrate胞质分裂调控蛋白1抗体包装500g
盐酸氮卓斯汀英文名称: Potassium silicate hydrate磷酸化蛋白磷酸酶2A(PP2Aα)抗体包装5mg
盐酸地芬尼多英文名称: Potassium stearate石骨症相关蛋白PLEKHM1抗体包装1g
盐酸丁卡因英文名称: Potassium tartrate, hydrate血小板白C激酶底物同源结构域M2抗体包装25g
盐酸度洛西汀英文名称: Potassium lurite血小板白C激酶底物同源结构域M3抗体包装5g
盐酸多塞平英文名称: Potassium tetraoxalate dehydrate多腺苷二磷酸多聚酶抗体(N端)包装1g
盐酸多沙普仑英文名称: Potassium thiosulfate酪氨酸磷酸酶PTPδ抗体 蛋白酪氨酸磷酸酶D受体抗体包装5g
盐酸伐昔洛韦/盐酸万乃洛韦英文名称: Potassium titanyl oxalate ,dehydrate钙粘蛋白相关神经受体8抗体包装1g
盐酸非那吡啶;3-苯基偶氮-2,6-二氨基吡啶盐酸盐英文名称: p-Phthaldehyde原钙粘附蛋白18抗体包装5g
盐酸非索非那定英文名称: Propyl red原钙粘附蛋白20抗体包装1g
盐酸芬戈莫德英文名称: Pyrazole原钙粘附蛋白8抗体包装25g
皮疽诺卡菌检测试剂盒(荧光PCR法)信号转导和转录激活因子5(STAT5)抗原16α-羟松苓新Human
信号转导和转录激活因子6抗原17-Hydroxy sprengerinin CHuman
雌**硫转移酶抗原2''-O-p-反式香豆酰荭草苷Human
类泛素蛋白2''-O-p-香豆酰牡荆素Human, Mouse
磷化微管相关蛋白多肽2''-O-鼠李糖羊藿次苷IIHuman, Mouse
微管相关蛋白2抗原2'-O-苦参Human
微管相关蛋白1A抗原2,3,5,4-四羟二苯乙烯葡萄糖苷,二苯乙烯苷Human
新型抑癌因(多肽)2,3,5,4-四羟二苯乙烯葡萄糖苷,二苯乙烯苷(标...Human, Mouse, Rat
转录因子7类似物2抗原2,3-脱氢维Human, Mouse
多肽N-乙酰氨半乳糖转移酶12抗体Phospho-LRP6 (Ser1490) /FITC 荧光素标记磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体IgG
多肽N-乙酰氨半乳糖转移酶1抗体LRP6/FITC 荧光素标记低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体IgG