PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 人博卡病毒和腺病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63819
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
(S)-盐酸氮卓斯汀英文名称: 9,9-Dimethyl-9H-9-silafluorene平足蛋白抗体(管内皮蛋白)包装1g
(S)-盐酸西汀英文名称: 2,7-Dibromophenanthrene-9,10-dione蛋白磷酸酯酶-1B抗体包装5g
(S)-盐酸乐卡地平英文名称: Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride蛋白质磷酸酶-2A抗体包装10g
(Z)-4-羟基它莫西芬英文名称: 1,4,5,8-Naphthalenetetracarboxdiimide磷酸酯酶-2Ac抗体包装50g
(±)-吡格雷盐酸盐英文名称: 3,4,9,10-Perylenetetracarboxylic Diimide磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(P-p38 MAPK)包装1g
(±)-柚皮素英文名称: SelenopheneD型-过氧化酶活化增生受体抗体包装250mg
(α/β)-1-氧基英文名称: 2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]过氧化酶活化增生受体γ抗体(PPARγ)包装100ml
(顺式)伏沙明英文名称: 1,3,6,8-Tetrabromopyrene孕受体抗体包装25ml
1'-Epi 盐酸吉西他滨英文名称: 2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-bifluorenylidene脯氨酸羟化酶抗体包装500ml
1'-Epi吉西他滨'-Dibenzoate英文名称: Copper(II) Phthalocyanine (α-form)早老素蛋白-1抗体包装1g
1,1'-[(1-基乙基)亚氨基]二[3-[4-(2...英文名称: Copper(II) Phthalocyanine (β-form)早老素蛋白-1抗体包装5g
1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-胆碱磷酸英文名称: Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)早老素蛋白-1抗体包装100mg
1,3-二-(o-叔丁基二基硅烷)-Fmoc-D-赤...英文名称: 3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin前列腺干抗原抗体包装1g
1,3-二(苄氧基)-5-尿嘧啶英文名称: 3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin突触后密度蛋白95抗体包装5g
1,3-二苄基-5-尿嘧啶英文名称: 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)P选择素抗体包装1g
人博卡病毒和腺病毒检测试剂盒(荧光PCR法)熊果苷
盐胞核嘧啶脱氧核糖核苷
洋地黄皂苷
异-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
柚皮素-7-鼠李葡萄糖苷
糖蛋白C抗体MAG-a/b /FITC 荧光素标记髓鞘相关糖蛋白a/b抗体IgG
γ氨丁酸运载蛋白1抗体MAGE-1/HLA-A1 protein /FITC 荧光素标记黑素瘤抗原-1抗体IgG