PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 百日咳杆菌和副百日咳杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63823
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
2,2'-联四唑-1,1'-二苯基(洛沙坦杂质)英文名称: 1-BromopyreneT凋亡相关蛋白TDAG51抗体包装500g
2,2-二基-4-异基-1,3-苯并二茂英文名称: 4-Bromopyrene蛋白酶调解因子9抗体包装25g
2,3,4-三-O-苯酰-泊酚-β-D-葡萄糖苷酸...英文名称: 1,6-Diaminopyrene胰腺抗体包装5g
2,3-去亚异基托吡酯英文名称: 1,3-Diaminopyrene纤溶酶相关蛋白B2抗体包装1g
2,3-脱氢辛伐他汀酸钠盐英文名称: 2,7-Di-tert-butylpyrene多聚合酶α/β/γ抗体包装5g
2,4-二(三基硅烷基)-5-尿嘧啶英文名称: 1-Nitropyrene含脯氨酸突触相关蛋白相互作用蛋白1抗体包装1g
2,4-二氨基-6-苯基-7-蝶啶英文名称: 4-Nitropyrene外周蛋白2抗体包装5g
2-(R)-[1-(R)-(3,5-二(三基)苯基...英文名称: 2-Aminofluorene区带蛋白PZP抗体包装100mg
2-[(2,6-二)氨基]苯英文名称: 2-Amino-9-fluorenone蛋白香叶烯基转移酶1β(FTβ)抗体包装1g
2-(巯基)腺苷 5'-三磷酸四钠盐合物英文名称: 2-Amino-9,9-dimethylfluorene原钙粘蛋白15抗体包装250mg
2-氨基-5,6-二-3(4H)-喹唑啉醋酸(阿那格...英文名称: 9-Bromofluorene原钙粘蛋白β2抗体包装1g
2-氨基-6,8-二羟基嘌呤盐酸盐英文名称: 2-Bromofluorene原钙粘蛋白β4抗体包装25g
2-氨基-6-羟基-8-巯基嘌呤英文名称: 2-Bromo-9-fluorenone原钙粘蛋白γ10抗体包装5g
2-氨基-6-巯基嘌呤-9-D-核苷合物英文名称: 2-Bromo-9,9-dimethylfluorene原钙粘蛋白γA4抗体包装1g
2-氨基腺苷英文名称: 2,7-Diaminofluorene原钙粘蛋白γA2抗体包装25g
百日咳杆菌和副百日咳杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)溴化太林相关蛋白2抗体花生四烯 ARACHIDONIC ACID(RG)Human
S100钙结合蛋白A8抗体L-(-)-阿拉伯糖 ARABITOL, L-(-)-(RG)Human
唾液结合性**球蛋白样凝集素抗体ASTILBIN(P)Human
唾液结合性**球蛋白样凝集素1抗体ARISTOLOCHIC ACID (I AND II)(RG)Human
转录因子SP3抗体魁蛤素硫盐 ARCAINE SULFATE(RG)Human
转录因子SP6抗体阿立新 ARICINE(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse
SPOP蛋白抗体ARJUNIC ACID(SH)Human, Mouse, Rat
钠离子/牛磺胆共转运蛋白抗体ARJUNGENIN(SH)Human, Mouse
生长抑素14抗体(2α,3β,19α)-2,3,19-三羟齐墩果-12-烯-28-羧 β-D-吡喃葡萄糖酯 ARJUNETIN(SH)Human, Mouse, Rat
磷酸化G氨丁酸B型受体2抗体Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) /FITC 荧光素标记磷酸化微管相关蛋白2抗体IgG
磷酸化G氨丁酸B型受体2抗体ERK1/MAPK3/FITC 荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶3抗体IgG