使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 肠道病毒通用型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63826
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通��选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
2-氧吡格雷盐酸盐(非对映异构体混合物)英文名称: Isoviolanthrone膜钙ATP酶1抗体包装500ml
2-乙酰氨基-2-脱氧-D-半乳糖酸英文名称: 2-Methylcyclopenta[l]phenanthrene膜钙ATP酶4抗体包装500mg
2-异基-6-基苯酚(泊酚杂质O)英文名称: Naphtho[2,3-a]pyrene膜钙ATP酶4B抗体包装1mg
21(R)-羟基孟鲁司特英文名称: 2-Chlorophenothiazine膜钙转运ATP酶抗体包装10g
21(S)-羟基孟鲁司特英文名称: 2-Chloro-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine溶质载体蛋白家族21成员2抗体包装100mg
24,32-双-O-(tert-butyldimeth...英文名称: Indanthrone脉周蛋白1抗体(胃癌抗原蛋白Ga50)包装500mg
25-O-去乙酰基利福布汀英文名称: Julolidine端粒酶抑制因子PinX-1抗体包装1g
25-羟基孟鲁司特英文名称: 9-Julolidinecarboxaldehyde泌乳素受体抗体包装25g
25-去乙酰基利福喷汀英文名称: 9,10-Phenanthrenequinone多囊肾蛋白1样3抗体包装5g
25-脱乙酰基利福平英文名称: Phenanthridine磷酸肌相互作用蛋白抗体包装100g
3''-羟基辛伐他汀酸钠盐英文名称: 2,2'-Bi-4-lepidine嘌呤核苷磷酸化酶抗体包装25g
3'-Epi 吉西他滨英文名称: 2,2'-Bipyrimidyl磷酸化蛋白激酶C/p-PKC ε抗体包装1g
3'-对羟基紫杉英文名称: 2,2'-Bicinchoninic Acid膜调控蛋白Paralemmin 1抗体包装5g
3'-羟基华法林英文名称: 1,2-Dimethyl-3-propylimidazolium Iodide脯氨酸羟化酶2抗体包装25g
3'-羟基辛伐他汀英文名称: Ethyltripropylammonium Iodide鞘脂激活蛋白原抗体包装5g
肠道病毒通用型检测试剂盒(荧光PCR法)血管非炎症分子1抗体辅酶 Q10 COENZYME Q10(Synthetic)(P)Human, Mouse, Rat
血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗体秋水仙素 COLCHICINE(RG)Human, Mouse
血管内皮生长因子C型抗体秋水仙素 COLCHICINE(RG)Human
囊泡相关膜蛋白3抗体辅酶 Q10 COENZYME Q10(Natural)(P)Human
空泡分选蛋白18抗体辅酶 Q10 COENZYME Q10(Natural)(P)Human, Mouse
磷化波形蛋白抗体辅酶 Q10 COENZYME Q10(Natural)(P)Human, Mouse, Rat
磷化波形蛋白抗体苦浆果 COCCULIN(SEE PICROTOXIN)(RG)Human, Mouse
鸟苷转换因子VAV1抗体辅酶 B12/腺苷钴 ADENOSYLCOBALAMINE(COENZYME B12)(P)Human
磷化鸟苷转换因子VAV1抗体辅酶 B12/腺苷钴 ADENOSYLCOBALAMINE(COENZYME B12)(P)Human, Mouse
GDP甘露糖焦磷酸化酶抗体MAPKK2 /FITC 荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶激酶2抗体IgG
G蛋白偶联受体171抗体SEK1/MKK4/FITC 荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。