使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: 柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型检测试剂盒(荧光PCR法) 规格: 50T 货号:BH-P63842 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。 PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 蛋白磷酸酶2C抗体包装1g 染色质组装因子1P55抗体包装25g RNA聚合酶1和转录释放因子抗体包装5g 磷脂酰丝氨酸脱羧酶PISD抗体包装25g 含patatin样磷脂酶1抗体包装25g 早幼粒白血病蛋白抗体包装5g 酪酪肽抗体包装100g 麻疯病和帕金森氏病共同调节蛋白抗体包装25g 环指蛋白131抗体包装5g 磷脂酶A2激活蛋白抗体包装10g 胸苷磷酸化酶抗体包装50g piwi样2蛋白抗体包装10mg 早老素蛋白-2抗体包装50g 组蛋白赖氨酸去基化酶PHF8抗体包装100ml 肿瘤坏死因子受体相关蛋白2抗体包装25ml 柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型检测试剂盒(荧光PCR法)血小板因子4抗体氨苄西林/氨苄青霉素(标准品) Zoledronic acid hydrate 血小板趋化因子7蛋白抗体氨苄西林钠(标准品) Pamidronate Disodium 干扰素诱导T趋化因子抗体氨丁三(标准品) Pamidronate Disodium B-**趋化因子抗体氨芬钠(标准品) Gentamicin sulfate 凋亡加强结构域蛋白12抗体氨比林(标准品) Gentamicin sulfate 凋亡加强结构域蛋白14抗体氨己(标准品) Cefuroxime Sodium 肌激酶M型抗体氨三乙(标准品) Cefuroxime Sodium NK受体BY55抗体氨苯(标准品) Ceftriaxone Sodium CD229抗体氨环(标准品) Ceftriaxone Sodium 腺苷酸环化酶Gα蛋白/Gαs/olf抗体TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠肥大类胰蛋白酶β2IgG 周期蛋白G相关激酶抗体MCT1/FITC 荧光素标记单羧酸转运蛋白-1抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: 柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型检测试剂盒(荧光PCR法) 规格: 50T 货号:BH-P63842 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 蛋白磷酸酶2C抗体包装1g
染色质组装因子1P55抗体包装25g
RNA聚合酶1和转录释放因子抗体包装5g
磷脂酰丝氨酸脱羧酶PISD抗体包装25g
含patatin样磷脂酶1抗体包装25g
早幼粒白血病蛋白抗体包装5g
酪酪肽抗体包装100g
麻疯病和帕金森氏病共同调节蛋白抗体包装25g
环指蛋白131抗体包装5g
磷脂酶A2激活蛋白抗体包装10g
胸苷磷酸化酶抗体包装50g
piwi样2蛋白抗体包装10mg
早老素蛋白-2抗体包装50g
组蛋白赖氨酸去基化酶PHF8抗体包装100ml
肿瘤坏死因子受体相关蛋白2抗体包装25ml 柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型检测试剂盒(荧光PCR法)血小板因子4抗体氨苄西林/氨苄青霉素(标准品) Zoledronic acid hydrate
血小板趋化因子7蛋白抗体氨苄西林钠(标准品) Pamidronate Disodium
干扰素诱导T趋化因子抗体氨丁三(标准品) Pamidronate Disodium
B-**趋化因子抗体氨芬钠(标准品) Gentamicin sulfate
凋亡加强结构域蛋白12抗体氨比林(标准品) Gentamicin sulfate
凋亡加强结构域蛋白14抗体氨己(标准品) Cefuroxime Sodium
肌激酶M型抗体氨三乙(标准品) Cefuroxime Sodium
NK受体BY55抗体氨苯(标准品) Ceftriaxone Sodium
CD229抗体氨环(标准品) Ceftriaxone Sodium
腺苷酸环化酶Gα蛋白/Gαs/olf抗体TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠肥大类胰蛋白酶β2IgG
周期蛋白G相关激酶抗体MCT1/FITC 荧光素标记单羧酸转运蛋白-1抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。