使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: 大肠杆菌stx2基因检测试剂盒(荧光PCR法) 规格: 50T 货号:BH-P63912 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。 PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确��。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 磷酸化酪氨酸激酶A抗体 磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体 磷酸化非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体 磷酸化钙调节蛋白-1抗体 磷酸化CREB转录共激活因子TORC2抗体 酪氨酸酶相关蛋白2抗体 TWIST蛋白抗体 磷酸化酪氨酸羟化酶抗体 拓普西异构酶Ⅰ抗体 肾小管间质肾炎抗原抗体 跨膜蛋白176A抗体 跨膜蛋白176A抗体 转录因子Tbx3抗体 tinagl1抗体 辣椒素受体5抗体 大肠杆菌stx2基因检测试剂盒(荧光PCR法)乙二脑病蛋白抗体26-脱氧升麻苷 3-AT 转录因子E2F-3抗体28-O-顺芷酰匙羹藤新苷元 Sodium phosphate, tribasic, dodecahydrate 转录因子E2F-5抗体28-去-β-香树脂 Sodium phosphate, dibasic, anhydrous DNA切除修复蛋白1抗体28-去-β-香树脂(标准品) Ferrozine 转录因子E2F6抗体2’-乙酰毛蕊花糖苷(标准品) Sodium acetate, trihydrate 胶质谷氨运载蛋白2抗体2”-O-没食子酰金丝桃苷(标准品) Thidiazuron 胶质谷氨运载蛋白3抗体(神经/上皮谷氨运载蛋白)3"-O-表没食子儿茶素没食子酯 Iodine 内皮素转化酶2抗体3',4',5',5,7-五氧黄(标准品) ADA, Alcohol dehydrogenase 嗜性粒阳离子蛋白抗体3',4',7-三羟黄(标准品) Tween-80 高尔体膜蛋白GP73抗体NADPH/FITC 荧光素标记抗NADPH氧化酶抗体IgG G蛋白偶联受体172B抗体Nanog/FITC 荧光素标记胚胎干关键蛋白抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
使用及效果: 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul 产品参数: 产品名称: 大肠杆菌stx2基因检测试剂盒(荧光PCR法) 规格: 50T 货号:BH-P63912 公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确��。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 磷酸化酪氨酸激酶A抗体
磷酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
磷酸化非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体
磷酸化钙调节蛋白-1抗体
磷酸化CREB转录共激活因子TORC2抗体
酪氨酸酶相关蛋白2抗体
TWIST蛋白抗体
磷酸化酪氨酸羟化酶抗体
拓普西异构酶Ⅰ抗体
肾小管间质肾炎抗原抗体
跨膜蛋白176A抗体
转录因子Tbx3抗体
tinagl1抗体
辣椒素受体5抗体 大肠杆菌stx2基因检测试剂盒(荧光PCR法)乙二脑病蛋白抗体26-脱氧升麻苷 3-AT
转录因子E2F-3抗体28-O-顺芷酰匙羹藤新苷元 Sodium phosphate, tribasic, dodecahydrate
转录因子E2F-5抗体28-去-β-香树脂 Sodium phosphate, dibasic, anhydrous
DNA切除修复蛋白1抗体28-去-β-香树脂(标准品) Ferrozine
转录因子E2F6抗体2’-乙酰毛蕊花糖苷(标准品) Sodium acetate, trihydrate
胶质谷氨运载蛋白2抗体2”-O-没食子酰金丝桃苷(标准品) Thidiazuron
胶质谷氨运载蛋白3抗体(神经/上皮谷氨运载蛋白)3"-O-表没食子儿茶素没食子酯 Iodine
内皮素转化酶2抗体3',4',5',5,7-五氧黄(标准品) ADA, Alcohol dehydrogenase
嗜性粒阳离子蛋白抗体3',4',7-三羟黄(标准品) Tween-80
高尔体膜蛋白GP73抗体NADPH/FITC 荧光素标记抗NADPH氧化酶抗体IgG
G蛋白偶联受体172B抗体Nanog/FITC 荧光素标记胚胎干关键蛋白抗体IgG 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。