使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 阪崎肠杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63937
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就��高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
肠道致病性大肠埃希氏菌活化转录因子5抗体Human LCOR ELISA Kit猪胱抑素C(CST3/Cys-C)试剂盒
梭菌活化转录因子6β抗体Human LCORL ELISA Kit猪胱硫β合酶(CBS)试剂盒
不动杆菌属AICAR甲酰基转移酶抗体Human LCTL ELISA Kit猪骨形成蛋白2(BMP-2)试剂盒
爪哇根霉磷酸化扩张性共济失调症突变蛋白抗体Human LDB3 ELISA Kit猪骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)试剂盒
酿酒酵母ATP5E蛋白抗体Human LDHAL6A ELISA Kit猪骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)试剂盒
毕赤酵母ATP5G2蛋白抗体Human LDB1 ELISA Kit猪骨成型蛋白7(BMP7)试剂盒
鸭疫里氏杆菌ATP6V0D2蛋白抗体Human LDLRAD1 ELISA Kit猪谷氨酰转氨酶 试剂盒
烬灰红链霉菌烬灰红亚种ATP6V1B2蛋白抗体Human LDOC1 ELISA Kit猪谷氨酰合成酶(GS)试剂盒
伪狂犬病病ATPIF1蛋白抗体Human LEFTY2 ELISA Kit猪睾酮(T)试剂盒
运动节杆菌Attractin蛋白抗体Human LEF1 ELISA Kit猪高铁血红蛋白(MHB)试剂盒
褐顶环柄菇磷酸化有丝分裂激酶B抗体Human LCTL ELISA Kit猪高尔基蛋白73(GP-73)试剂盒
枯草芽孢杆菌肌动蛋白相关蛋白M1抗体Human LDB1 ELISA Kit猪肝炎病的受体1/肾损伤分子1/KIM1(HAVCR1)试剂盒
米曲霉ALKB蛋白抗体Human LDB3 ELISA Kit猪肝生长因子(HGF)试剂盒
赭色掷孢酵母乙酰辅酶A酰基转移酶1抗体Human LDHAL6A ELISA Kit猪甘油-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)试剂盒
石榴嗜蓝孢孔菌磷酸化β-肌动蛋白抗体Human LAX1 ELISA Kit猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2δ(CAMK2D)试剂盒
酿酒酵母磷酸化肾上腺素能受体β2/β2-AR 抗体Human LATS2 ELISA Kit猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CAMK2G/CAMKG)试剂盒
阪崎肠杆菌检测试剂盒(荧光PCR法)异钩藤(标准品)Human
异荭草苷(标准品)Human, Mouse
异槲皮苷(标准品)Human, Mouse
异黄腐Human
异黄芪皂苷I(标准品)Human, Mouse
异黄芪皂苷II(标准品)Human, Mouse
异黄芪皂苷IV(标准品)Human, Mouse
异茴芹内酯(标准品)Human
异苦参Human, Mouse
谷氨酸受体红藻氨酸离子1抗体Phospho-Merlin (Ser518) /FITC 荧光素标记磷酸化2型神经纤维瘤抗体IgG
一般受体磷酸肌相关支架蛋白1抗体NF-L/FITC 荧光素标记低分子量神经丝蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。