PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 甲型肝炎病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63941
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
巨大芽胞杆菌自噬相关蛋白18抗体Human MARVELD3 ELISA Kit猪白介素22(IL-22)试剂盒
杏鲍菇自噬相关蛋白4A抗体Human MAS1L ELISA Kit猪白介素2(IL-2)试剂盒
鲜绿青霉载脂蛋白A4抗体Human MAST1 ELISA Kit猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)试剂盒
芽孢杆菌12脂氧合酶抗体Human MAST3 ELISA Kit猪白介素1β (IL-1β)试剂盒
血红红曲菌血管紧张素III抗体Human C10orf58(Redox-regulatory protein FAM213A) ELISA Kit猪白介素1α(IL-1α)试剂盒
乳杆菌属腺苷酸环化酶3抗体Human NY-ESO-1(Cancer/testis antigen 1) ELISA Kit猪白介素18(IL-18)试剂盒
苏云金芽孢杆菌肯尼亚亚种血管动蛋白抗体Human Caspase 12 ELISA Kit猪白介素17(IL-17)试剂盒
水稻汉纳酵母腺病早期E1A蛋白抗体Human CD320 ELISA Kit猪白介素15(IL-15)试剂盒
球形赖氨酸芽孢杆菌磷酸化活化复制因子2抗体Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit猪白介素13(IL-13)试剂盒
Aureimonas pseudogalii磷酸化活化复制因子2抗体Human TMPRSS15(Enteropeptidase) ELISA Kit猪白介素12(IL-12/P70)试剂盒
大肠埃希氏菌磷酸化失调症蛋白1抗体Human SPAST(Spastin) ELISA Kit猪白介素12(IL-12/P40)试剂盒
香菇锚蛋白重复结构域蛋白17抗体Human MLKL(mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit猪白介素10(IL-10)试剂盒
果生假丝酵母胞质乙脱氢酶1抗体Human TOM20(translocase of outer mitochondrial membrane 20 homolog) ELISA Kit猪白介素1(IL-1)试剂盒
天蓝色链霉菌ADP核糖基化样因子ARL3抗体Human HSD3B7(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 7) ELISA Kit猪白蛋白试剂盒
三叶草根瘤菌花生四烯酸15脂氧合酶1抗体Human MVK(Mevalonate kinase) ELISA Kit猪γ干扰素(IFN-γ)试剂盒
解几丁质纤维单胞菌癌增强蛋白2抗体Human CD97(CD97 antigen) ELISA Kit猪γ淀粉酶(AMY)试剂盒
甲型肝炎病毒检测试剂盒(荧光PCR法)异三乙酰酯Human, Mouse, Rat
异戊酯Human, Mouse, Rat
硬脂丁酯Human, Mouse
硬脂乙酯Human, Mouse
油胆甾酯Human, Mouse, Rat
油酯Human, Mouse, Rat
原三乙酯Human, Mouse, Rat
原硅乙酯Human, Mouse, Rat
原三乙酯Human, Mouse, Rat
通用转录因子GTF2B抗体Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870)/FITC 荧光素标记核因子/k因结合核因子p100抗体IgG
磷酸化gp130抗体p-NFKBp65(Ser536)/FITC 荧光素标记磷酸化核因子/磷酸化k因结合核因子抗体IgG