使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 普马拉病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63948
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复���)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
黑根霉衔接蛋白α-Adaptin抗体Human LYRM7 ELISA Kit小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgM)试剂盒
粘性丝孢酵母凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)Human LYPLAL1 ELISA Kit小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgG)试剂盒
黑曲霉凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)Human LYAR ELISA Kit小鼠印度猬因子(IHH)试剂盒
冷温木拉克酵母三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体Human LY6K ELISA Kit小鼠吲哚2,3-双加氧酶1(IDO1)试剂盒
长枝木霉载脂蛋白E抗体Human LYN ELISA Kit小鼠音猬因子N端(Shh-N)试剂盒
鸡伤寒沙门氏菌淀粉样肽前体蛋白抗体Human LYG1 ELISA Kit小鼠抑制素B(INH-B)试剂盒
弯孢菌水通道蛋白-2抗体Human LY96 ELISA Kit小鼠抑制素A(INH-A)试剂盒
枯草芽孢杆菌血管紧张素原抗体Human LYPLAL1 ELISA Kit小鼠抑瘤素M(OSM)试剂盒
大肠埃希氏杆菌雄受体抗体Human LYRM7 ELISA Kit小鼠乙型肝炎核心抗体(HBcAb)试剂盒
茯苓死亡调节蛋白抗体(凋亡、半胱酸蛋白酶激活抑制剂)Human LYPLA1 ELISA Kit小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂盒
荧光假单胞菌轴蛋白1抗体Human LUC7L ELISA Kit小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌自噬相关蛋白9B抗体Human LUC7L2 ELISA Kit小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)试剂盒
放线纤维菌自噬相关蛋白12抗体Human LSM8 ELISA Kit小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)试剂盒
蓝色犁头霉自噬相关蛋白13抗体Human LSM5 ELISA Kit小鼠乙酰辅酶A 试剂盒
休哈塔假丝酵母自噬相关蛋白3抗体Human LSP1 ELISA Kit小鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)试剂盒
连香树迪兹氏菌整合素样金属蛋白酶与凝血酶4型抗体Human LSM7 ELISA Kit小鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)试剂盒
普马拉病毒检测试剂盒(荧光PCR法)异质核糖核蛋白hnRNPA2抗体葶苈子(播娘蒿)(标准品) Tazobactam Acid
异质核糖核蛋白U抗体葶苈子(独行菜)(标准品) Tazobactam Acid
人类状瘤病16/18 E6抗体通关藤(标准品) β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate(β-NAD)
HA tag标签抗体通关藤苷G(标准品) β-Nicotinamide adenine dinucleotide
***敏感脂肪酶抗体通关藤苷H(标准品) β-NADP
血红蛋白α1/α-Globin抗体通关藤苷I(标准品) Guanine HCl
Fas相互作用蛋白激酶2抗体麝香(标准品) Guanine Sulfate
Fas相互作用蛋白激酶3抗体头花蓼(标准品) Adenine hydrochloride
人类疱疹病8抗体透骨香(标准品) Inosine
原钙粘蛋白γA1抗体NIT2/FITC 荧光素标记抗NIT2蛋白抗体IgG
G蛋白偶联受体70抗体NKA/FITC 荧光素标记神经激肽A抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。