使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 拉沙热病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63949
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
巨大芽孢杆菌磷酸化活化复制因子2抗体Human LSR ELISA Kit小鼠乙酰胆碱(ACH)试剂盒
食吡啶红球菌磷酸化APP(Tyr757)淀粉样肽前体蛋白抗体Human LUC7L2 ELISA Kit小鼠胰脂肪酶(PL)试剂盒
普通青霉丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ATR抗体Human LUC7L ELISA Kit小鼠胰激肽原酶(PK)试剂盒
酿酒酵母去整合素样金属蛋白酶18抗体Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit小鼠胰高血糖素样肽2(GLP-2)试剂盒
小牛葡萄球菌活化转录因子6抗体Human LUZP1 ELISA Kit小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)试剂盒
酿酒酵母衔接蛋白β抗体Human LXN ELISA Kit小鼠胰高血糖素(GC)试剂盒
德氏乳杆菌保加利亚亚种衔接蛋白γ/γ-Adaptin抗体Human LY6D ELISA Kit小鼠胰淀素(Amylin)试剂盒
粪产碱菌水通道蛋白-9抗体Human LSM10 ELISA Kit小鼠胰岛抗体(ICA)试剂盒
根瘤菌膜粘连蛋白A3抗体Human LY6E ELISA Kit小鼠胰岛素自身抗体(IAA)试剂盒
毛头鬼伞膜粘连蛋白 A4抗体Human LSM11 ELISA Kit小鼠胰岛素原(PI)试剂盒
丁香尾孢自噬相关蛋白8A抗体Human LY6G5B ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)试剂盒
白僵菌磷酸化蛋白激酶B抗体Human LRRC47 ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)试剂盒
枝孢属磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体Human LRRC47 ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)试剂盒
溶淀粉类芽孢杆菌磷酸化蛋白激酶B抗体Human LRRC4C ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)试剂盒
新城疫病脱氧胞苷脱氨酶蛋白抗体Human LSM14A ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)试剂盒
木材游动四孢菌蛋白激酶锚定蛋白13抗体Human LRSAM1 ELISA Kit小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)试剂盒
拉沙热病毒检测试剂盒(荧光PCR法)异质核糖核蛋白K抗体3-(3-羟苯)(标准品) Fmoc-Asn(Trt)-OH
异质核糖核蛋白L抗体3-Deoxyaconitine Fmoc-Lys(Z)-OH
HER2受体单克隆抗体3-O-Acetyl-16α-hydroxytrame... Fmoc-Lys-OH·HCl
癌分化因子P45抗体 Heregulinβ3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李... Oxyresveratrol
肝脂酶抗体3-O-乙酰-16α-羟松苓新 Oxyresveratrol
磷化组蛋白去乙酰化酶1抗体3’-氧芹菜苷;柯伊利素-7-O-葡萄糖-2-O-... Acetyl-resveratrol
解旋酶样转录因子抗体3β,7β,12β-三羟-11,15-二羰-羊毛甾... Acetyl-resveratrol
三羟三辅酶A合成酶2抗体3β,7β,15β-三羟-11-羰-羊毛甾烷-8-... Fmoc-Lys(Mtt)-OH
人类白抗原A抗体3β-乙酰氧-7,25-甘遂二烯-24(R)-(标... Fmoc-Thr(Bzl)-OH
G蛋白偶联受体71抗体NK-1/Substance P Receptor /FITC 荧光素标记P物质受体抗体IgG
谷氨酸受体δ2/GluR-δ2抗体NK-2R/FITC 荧光素标记神经激肽A受体/K物质受体抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。