使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 钩端螺旋体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63953
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
石榴干腐菌通用转录因子IIA样因子抗体Human LIN28B ELISA Kit小鼠血管内皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)试剂盒
小丛壳属自噬相关蛋白4D抗体Human LHPP ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3/Flt-4)试剂盒
类谷糠乳杆菌自噬相关蛋白9A抗体Human LIN7C ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)试剂盒
大豆慢生根瘤菌缩酶C抗体Human LILRA5 ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)试剂盒
产气荚膜梭菌 素C型谷草转氨酶抗体Human LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子D(VEGF-D)试剂盒
土生类诺卡氏菌三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员5抗体Human LILRA4 ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子C(VEGF-C)试剂盒
樟疫霉三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员8抗体Human LIMD2 ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子B(VEGF-B)试剂盒
黄色长孢链霉菌酰基辅酶A脱氢酶长链抗体Human LILRB5 ELISA Kit小鼠血管内皮生长因子(VEGF)试剂盒
果生链核盘菌酰基辅酶A脱氢酶中链抗体Human LIMK1(LIM domain kinase 1) ELISA Kit小鼠血管紧张素转化酶2(ACE2)试剂盒
地衣芽孢杆菌酰基辅酶A脱氢酶短链抗体Human LIMS1 ELISA Kit小鼠血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒
白金针菇过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1抗体Human LIMK2 ELISA Kit小鼠血管紧张素原(aGT)试剂盒
大肠埃希氏菌磷酸化凋亡信号调节激酶1抗体Human LGI3 ELISA Kit小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒
白黄侧耳转化生长因子β诱导蛋白3抗体(半胱氨酸和丝氨酸富含核蛋白1)Human LGI2 ELISA Kit小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)试剂盒
微小杆菌有丝分裂激酶A/B/C抗体Human LGI2 ELISA Kit小鼠血管紧张素1-7(Ang1-7)试剂盒
苏云金芽孢杆菌蛋白酪氨酸激酶ATK抗体Human LIMS1 ELISA Kit小鼠血管活性肠肽(VIP)试剂盒
藤黄类诺卡氏菌长链脂肪酸辅酶A连接酶1/2抗体Human LIMK2 ELISA Kit小鼠雄烯二酮(ASD)试剂盒
钩端螺旋体检测试剂盒(荧光PCR法)抑癌蛋白TCHP抗体丁 BUTANAL(SG)Human
T急性**性白血病1蛋白/**瘤蛋白5抗体紫堇盐盐 BULBOCAPNINE HCL(RG)Human, Mouse, Rat
胚胎干相关蛋白TXNDC9抗体草乌素 A BULLEYACONITINE A(RG)Human, Mouse
转录因子9抗体草乌素 A BULLEYACONITINE A(RG)Human
转录因子THOC2抗体草乌素 A BULLEYACONITINE A(RG)Human
胸腺素β4抗体白当归脑 BYAKANGELICOL(P)Human
转移生长因子β3(TGFβ3)抗体白当归脑 BYAKANGELICOL(P)Human
转化生长因子β(TGFβ)抗体白当归脑 BYAKANGELICOL(P)Human
转化生长因子β2(TGFβ2)抗体白当归素 BYAKANGELICIN(P)Human
糖皮质**受体抗体CD328/Siglec-7/FITC 荧光素标记唾液酸结合性**球蛋白样凝集素7抗体IgG
胰高血糖素样肽-1抗体CD329/SIGLEC9/FITC 荧光素标记唾液酸结合性**球蛋白样凝集素9抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。