使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 莫氏立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63954
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的��基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
季也蒙迈耶氏酵母过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶2抗体Human LGP2 ELISA Kit小鼠雄受体(AR)试剂盒
平田头菇胆固酰基转移酶1抗体Human LGI3 ELISA Kit小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)试剂盒
酿酒酵母磷酸化间变型瘤激酶抗体Human LGR5 ELISA Kit小鼠性结合球蛋白(SHBG)试剂盒
短密木霉磷酸化ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体Human LGR6 ELISA Kit小鼠新生甲状腺素(NN-T4)试剂盒
粘质沙雷氏菌磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体Human LDLRAD1 ELISA Kit小鼠心钠肽(ANP)试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化腺泡Acinus蛋白抗体Human LCOR ELISA Kit小鼠心肌转录因子GATA3 试剂盒
白僵菌磷酸化肾上腺素能受体β2抗体Human LDOC1 ELISA Kit小鼠心肌营养素1(CT-1)试剂盒
黑曲霉APS抗体Human LCORL ELISA Kit小鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)自身抗体试剂盒
粪肠球菌(粪链球菌)激活素受体样激酶1抗体Human LEF1 ELISA Kit小鼠心肌肌钙蛋白(cTn-Ⅰ)试剂盒
藤黄微球菌激活素A受体1B抗体Human LDHAL6A ELISA Kit小鼠腺苷高半胱氨酸酶(AHCY)试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化雄受体抗体Human LCTL ELISA Kit小鼠腺病IgG抗体试剂盒
浅黄链霉菌磷酸化A-Raf抗体Human LDB1 ELISA Kit小鼠线粒体呼吸链复合物I试剂盒
牛链球菌 兰氏D群酰基鞘氨脱酰酶2抗体Human LDLRAD1 ELISA Kit小鼠纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)试剂盒
大肠埃希菌脂肪特异性粘附分子抗体Human LDB3 ELISA Kit小鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)试剂盒
酿酒酵母腺相关病5抗体Human LEF1 ELISA Kit小鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)试剂盒
大肠杆菌腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗体Human LDOC1 ELISA Kit小鼠纤连蛋白(FN)试剂盒
莫氏立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)抑癌因5抗体矢车菊黄素 CENTAUREIDINE(RG)(PLEASE CALL)Human
脑肿瘤抑癌蛋白1抗体矢车菊黄素 CENTAUREIDINE(RG)(PLEASE CALL)Human
肺癌抑癌蛋白1抗体诃子鞣 CHEBULAGIC ACID(RG)Human, Mouse, Rat
前列腺癌抑癌蛋白3抗体诃子鞣 CHEBULAGIC ACID(RG)Chicken
状腺**受体α1抗体苦瓜甙 CHARANTIN(P)Human, Mouse, Rat
状腺**受体α1+α2抗体苦瓜甙 CHARANTIN(P)Human, Mouse, Rat
脂滴相关蛋白TIP47抗体诃子林鞣 CHEBULINIC ACID(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
肿瘤抑制因Testin抗体诃子林鞣 CHEBULINIC ACID(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
肿瘤血管内皮标记相关蛋白质7抗体母菊薁 CHAMAZULEN(RG)Human, Mouse, Rat
葡萄糖转运蛋白3抗体CD337/NKp30/NCR3/FITC 荧光素标记性受体NK-p30抗体IgG
凝溶胶蛋白抗体SIGLEC10/SLG2/FITC 荧光素标记唾液酸结合性**球蛋白样凝集素抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。