PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 三日疟原虫检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63958
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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孢吸水链霉菌α增强子结合蛋白1抗体Human KLHL32 ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)试剂盒
荷叶蘑脊髓小脑共济失调10抗体Human KLHL35 ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)试剂盒
多栏纯洁杆菌蛋白激酶A锚定蛋白7抗体Human KLHL34 ELISA Kit小鼠糖原合成酶激酶(GSK)试剂盒
苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种腺苷三磷酸结合盒转运体12抗体Human KRT12 ELISA Kit小鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)试剂盒
Arthrobacter腺苷三磷酸结合盒转运体9抗体Human KLHL10 ELISA Kit小鼠糖皮质类固受体(GR)试剂盒
弗雷德里克斯堡假单胞菌三磷酸腺苷结合盒转运蛋白4抗体Human KRT33B ELISA Kit小鼠糖皮质受体β(GR-β)试剂盒
孢小克银汉霉肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体Human KRT34 ELISA Kit小鼠糖皮质受体α(GR-α)试剂盒
球孢白僵菌高尔基复合体相关蛋白1抗体Human KRT36 ELISA Kit小鼠糖类抗原199(CA199)试剂盒
暗灰链霉菌乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体Human KLHL4 ELISA Kit小鼠糖类抗原125(CA125)试剂盒
酿酒酵母腺嘌呤核苷酸转运蛋白1、2、3、4抗体Human KLHL9 ELISA Kit小鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)试剂盒
芽孢杆菌去整合素样金属蛋白酶12Human KLRF1 ELISA Kit小鼠糖蛋白130(gp130)试剂盒
大肠杆菌磷酸化乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体Human KRT40 ELISA Kit小鼠碳酸酐酶2(CA-2)试剂盒
卡尔斯巴德唯盐菌膜粘连蛋白2受体抗体Human KPNA1 ELISA Kit小鼠碳酸酐酶1(CA-1)试剂盒
单孢共头霉晚期糖基化终末产物特异性受体抗体Human KLRG1 ELISA Kit小鼠胎球蛋白A(Fetuin A)试剂盒
奇异球菌ADCK5蛋白抗体Human KLHL28 ELISA Kit小鼠胎盘生长因子(PLGF)试剂盒
三日疟原虫检测试剂盒(荧光PCR法)益智(益智仁)(标准品)Human, Mouse, Rat
益智(标准品)Human, Mouse
薏苡仁(标准品)Human, Mouse
薏苡仁油(标准品)Human, Mouse, Rat
茵陈(滨蒿)(标准品)Human
茵陈(茵陈蒿)(标准品)Human
茵芋苷Human, Mouse
羊藿(羊藿)(标准品)Human, Mouse, Rat
羊藿次苷F2Human, Mouse, Rat
脑肠肽抗体Nociceptin/FITC 荧光素标记孤菲肽/痛敏肽抗体IgG
胰高血糖素样肽-2抗体Nociceptin receptor/FITC 荧光素标记孤菲肽受体/痛敏肽受体抗体IgG