使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 登革病毒通用型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63963
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
固氮菌聚集蛋白抗体Human KHDC1 ELISA Kit小鼠热休克因子1(HSF1)试剂盒
葡萄座腔菌调亡诱导因子抗体Human KHDC3L ELISA Kit小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)试剂盒
柠檬黄色红色杆菌调亡诱导因子抗体Human KDSR ELISA Kit小鼠热休克蛋白90(HSP-90)试剂盒
台湾根霉间变型瘤激酶抗体Human KHSRP ELISA Kit小鼠热休克蛋白70(HSP-70)试剂盒
烟色拟盘多毛孢α-甲基酰基辅酶A消旋酶抗体Human KHDRBS3 ELISA Kit小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)试剂盒
假单胞菌属膜粘连蛋白A1抗体Human KIF1C ELISA Kit小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)试剂盒
葡萄座腔菌自噬相关蛋白1抗体Human KIF20A ELISA Kit小鼠热休克蛋白27(HSP-27)试剂盒
胶孢β淀粉样肽1-16/Aβ1-16 抗体Human KIAA1191 ELISA Kit小鼠热休克蛋白20(Hsp-20)试剂盒
洋葱伯克霍尔德氏菌腺瘤肉调节蛋白抗体Human KIAA1468 ELISA Kit小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)试剂盒
乳粉 乳酸菌计数 衔接因子蛋白含pH域蛋白1抗体Human CEMIP(Cell migRation-inducing and hyaluronan-binding protein) ELISA Kit小鼠固酮(ALD)试剂盒
德氏乳杆菌德氏亚种水通道蛋白-7抗体Human KIAA1429 ELISA Kit小鼠去甲肾上腺素(NA)试剂盒
波兰青霉谷氨酸氨基转移酶1抗体Human KIAA1530 ELISA Kit小鼠趋化因子配体1(CCL1)试剂盒
枯草芽孢杆菌p21活化蛋白激酶ARHG7抗体Human KIAA1602 ELISA Kit小鼠趋化因子(FK)试剂盒
三宝垄根霉磷酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体Human KIDINS220 ELISA Kit小鼠趋化因子(CC基序)配体2(MRC2)试剂盒
浅黄微杆菌2-氨基乙硫双加氧酶抗体Human KIAA0430 ELISA Kit小鼠(HYD)试剂盒
松杉灵芝血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体Human KIAA1984 ELISA Kit小鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)试剂盒
登革病毒通用型检测试剂盒(荧光PCR法)樱黄素(标准品)Human, Mouse, Rat
鹰嘴豆芽素A(标准品)Human, Mouse, Rat
硬飞燕草(标准品)Human
油菜花粉(标准品)Human
柚皮苷(标准品)Human, Mouse, Rat
柚皮苷二氢查尔Human, Mouse, Rat
柚皮苷二氢查尔(标准品)Human, Mouse
柚皮素(标准品)Human, Mouse
右旋蛇菰宁Human
颗粒酶B抗体NuMA/FITC 荧光素标记核有丝分裂器NuMA蛋白抗体IgG
G蛋白偶联受体30抗体Phospho-NuMA (Ser395) /FITC 荧光素标记磷酸化核有丝分裂器NuMA蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。