PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 登革病毒1型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63965
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
黑色浅灰链霉菌血管**素样蛋白4抗体Human KCNIP1 ELISA Kit小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)试剂盒
弗吉尼亚链霉菌整合素样金属蛋白酶与凝血酶10型抗体Human KCTD14 ELISA Kit小鼠破伤风(Tetanus)抗体试剂盒
镰刀菌嘌呤嘧啶核酸内切酶2抗体Human KCNIP3 ELISA Kit小鼠破骨分化因子(ODF)试剂盒
根瘤菌神经丝蛋白抗体Human KCNJ5 ELISA Kit小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)试剂盒
腐皮壳β淀粉样肽(1-28)抗体Human KCNAB1 ELISA Kit小鼠嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP)试剂盒
锈色杆孢囊菌有丝分裂激酶B抗体Human KCNAB2 ELISA Kit小鼠皮质酮/肾上腺酮(CORT)试剂盒
灰葡萄孢(灰霉病菌)软骨蛋白聚糖抗体Human KCNC4 ELISA Kit小鼠皮质(Cortisol)试剂盒
毛榛毕赤酵母去整合素样金属蛋白酶10抗体Human KCNB1 ELISA Kit小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)试剂盒
酿酒酵母含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族9抗体Human KCNE1 ELISA Kit小鼠凝血因子XIII B(F13B)试剂盒
蜡磨属含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族8抗体Human KCNE4 ELISA Kit小鼠凝血因子XIII A1(F13A1)试剂盒
酿酒酵母植物生长ABP1抗体Human KARS ELISA Kit小鼠凝血因子VIIIa轻链(F8aLC)试剂盒
大肠埃希氏菌肌动蛋白相关蛋白1抗体Human KCNF1 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)试剂盒
金针菇(毛柄菌、冬菇)α红分化相关因子抗体Human KCNB1 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅺ(FⅪ)试剂盒
葡萄链格孢*血管紧张素激活蛋白1抗体Human KCNG4 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)试剂盒
焦曲霉Alpha清蛋白抗体Human KCNAB2 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)试剂盒
粘质沙雷氏菌AFAP1L2抗体Human KCNC4 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅷ(FⅧ)试剂盒
登革病毒1型检测试剂盒(荧光PCR法)荧光素APC标记人IgM榧子(标准品)Human, Mouse, Rat
荧光素APC标记人IgA粉萆薢(标准品)Human
荧光素APC标记猴IgG粉防己;汉防己素(标准品)Human
荧光素APC标记猴IgM枫香脂(标准品)Human
荧光素APC标记猪IgG蜂房(标准品)Human
荧光素APC标记大鼠IgM蜂胶(标准品)Human
荧光素APC标记猪胰岛素蛋白凤尾草(标准品)Human, Mouse, Rat
荧光素APC标记血蓝蛋白凤仙萜四苷AHuman
荧光素APC标记人血白蛋白凤仙萜四苷BHuman
GDNF家族受体α-1抗体NOS-3/eNOS /FITC 荧光素标记一氧化氮合成酶-3抗体(内皮型)IgG
运动神经元存活蛋白结合蛋白1抗体Phospho-eNOS (Thr495)/FITC 荧光素标记磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)IgG