使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 登革病毒2型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63966
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
Methylobacterium神经分化相关蛋白AHNAK抗体Human KCNE4 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅶ(FⅦ)试剂盒
嘴突凸脐蠕孢粘合连接相关蛋白1抗体Human KCNE1 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅵ(FⅥ)试剂盒
球毛壳去整合素样金属蛋白酶13抗体Human KCNF1 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅴ(FⅤ)试剂盒
Marisediminicola聚集蛋白抗体Human KCNG4 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅳ(FⅣ)试剂盒
新月弯孢转录因子AP2α+β抗体Human KARS ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)试剂盒
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum磷酸化腺瘤样息肉抗体Human ITPKC ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)试剂盒
香菇磷酸化周期末期促进复合蛋白APC1抗体Human JAML ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅰ(FⅠ)试剂盒
耐辐射奇球菌突变株周期后期促进蛋白亚基10抗体Human JIP1 ELISA Kit小鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)试剂盒
柱状环伞菌(柳菇、茶新菇)周期后期促进蛋白亚基11抗体Human IVD(Isovaleryl-CoA dehydrogenase) ELISA Kit小鼠凝血酶受体(TR)试剂盒
高大毛壳腺瘤性结肠息肉病蛋白2抗体Human ITPR1 ELISA Kit小鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)试剂盒
Achromobacter denitrificans磷酸化分裂周期蛋白16抗体Human ISG20 ELISA Kit小鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)试剂盒
米根霉DNA修复酶相互作用蛋白抗体Human IVNS1ABP ELISA Kit小鼠尿微量白蛋白(ALB)试剂盒
嗜果刀孢脂肪膜相关蛋白抗体Human ISM2 ELISA Kit小鼠尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)试剂盒
暗产色链霉菌载脂蛋白A1结合蛋白抗体抗体Human IWS1 ELISA Kit小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒
链霉菌载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物1抗体Human ISYNA1 ELISA Kit小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)试剂盒
大肠埃希氏杆菌载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物2抗体Human ISG20L2 ELISA Kit小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)试剂盒
登革病毒2型检测试剂盒(荧光PCR法)荧光素APC标记胰糜蛋白酶凤仙萜四苷CHuman, Mouse
荧光素Cy3标记链霉亲和素凤仙萜四苷FHuman, Mouse, Rat
荧光素Cy3标记亲合素凤仙萜四苷GHuman
Cy3标记蛋白A凤仙萜四苷KHuman, Mouse
荧光素Cy3标记兔IgG(流式同型对照)凤仙萜四苷MHuman, Mouse
荧光素Cy3标记小鼠IgG(流式同型对照)佛手(标准品)Human
荧光素Cy3标记羊IgG(流式同型对照)佛手柑内酯(标准品)Human, Mouse
荧光素Cy3标记大鼠IgG(流式同型对照)佛手柑素;香柠檬素;佛手柑亭;香柠檬亭(标准品)Human
荧光素Cy3标记牛IgG佛司可林(标准品)Human, Mouse
葡萄糖转运蛋白1抗体Phospho-eNOS (Ser1177) /FITC 荧光素标记磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)IgG
葡萄糖转运蛋白2抗体Phospho-eNOS (Ser113)/FITC 荧光素标记磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。