PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 登革病毒3型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63967
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
苏云金芽孢杆菌载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3B抗体Human JUNB ELISA Kit小鼠脑钠素/脑钠尿肽(BNP)试剂盒
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吉氏芽孢杆菌载脂蛋白C1抗体Human Kallikrein 11 ELISA Kit小鼠脑啡肽原B(PDYN)试剂盒
谢瓦散囊菌载脂蛋白C2抗体Human JAKMIP1 ELISA Kit小鼠脑啡肽原A(PENK)试剂盒
耐辐射奇球菌载脂蛋白L1抗体Human IYD ELISA Kit小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)试剂盒
瘤突曲霉载脂蛋白L4抗体Human KALRN ELISA Kit小鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)试剂盒
球孢白僵菌载脂蛋白L5抗体Human JAKMIP2(Janus kinase and microtubule-interacting protein 2) ELISA Kit小鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)试剂盒
纺锤雷素链霉菌载脂蛋白M抗体Human KANK1 ELISA Kit小鼠内皮脂肪酶(EL)试剂盒
香菇载脂蛋白O抗体Human JAML ELISA Kit小鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)试剂盒
宛氏拟青霉β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体Human JAKMIP2(Janus kinase and microtubule-interacting protein 2) ELISA Kit小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)试剂盒
抗生链霉菌共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体Human JAM2 ELISA Kit小鼠内皮素1(ET-1)试剂盒
苏云金芽孢杆菌三号染色体开放阅读框抗体Human KANK2 ELISA Kit小鼠腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)试剂盒
林生毛霉腺嘌呤磷酸核糖转移酶抗体Human KANK2 ELISA Kit小鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)试剂盒
产氨短杆菌磷酸化水通道蛋白2抗体Human JAM2 ELISA Kit小鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)试剂盒
伯克霍尔德氏菌ADP核糖基化因子1抗体Human JAML ELISA Kit小鼠缪勒管抑制物质/抗缪勒管(AMH)试剂盒
坚强芽孢杆菌乙型肝炎病X相关蛋白2抗体Human JIP1 ELISA Kit小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)试剂盒
登革病毒3型检测试剂盒(荧光PCR法)荧光素Cy3标记大鼠IgM甘草(标准品)Human, Mouse, Rat
荧光素Cy3标记重组人白介素-1受体拮抗剂甘草单铵盐(标准品)Human
荧光素Cy3标记血蓝蛋白甘草二铵盐(标准品)Human, Mouse, Rat
荧光素Cy3标记鸡卵白蛋白甘草异黄AHuman, Mouse
荧光素Cy3标记人血白蛋白甘木通(标准品)Human, Mouse, Rat
荧光素Cy3标记胰糜蛋白酶甘青青兰(标准品)Human
Alexa Fluor 555标记羊IgG(流式同型对照)甘松(标准品)Human, Mouse, Rat
Alexa Fluor 555标记大鼠IgG(流式同型对照)甘遂(标准品)Human
荧光素PE-Cy7标记兔IgG(流式同型对照)甘西鼠尾草Human, Mouse
磷酸化糖皮质**受体抗体Notch1/MOTC /FITC 荧光素标记跨膜受体蛋白Notch-1抗体IgG
G蛋白偶联受体GPR158蛋白抗体Notch3/FITC 荧光素标记跨膜受体蛋白Notch-3抗体IgG