使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 登革病毒3型和4型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63970
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
北京棒杆菌磷酸化自噬相关蛋白4D抗体Human IRF6(Interferon regulatory factor 6) ELISA Kit小鼠粒集落激因子(G-CSF)试剂盒
洋葱假单胞菌磷酸化自噬相关蛋白4C抗体Human INPP5A ELISA Kit小鼠酪氨酸羟化酶(TH)试剂盒
粪锈伞磷酸化自噬相关蛋白7抗体Human INPP5B ELISA Kit小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)试剂盒
印度拜叶林克氏菌磷酸化自噬相关蛋白16A抗体Human INPP5E ELISA Kit小鼠克拉拉蛋白(CC16)试剂盒
酿酒酵母磷酸化自噬相关蛋白9A抗体Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)试剂盒
毛榛毕赤酵母磷酸化自噬相关蛋白4D抗体Human INPP5K ELISA Kit小鼠可溶性血小板内皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)试剂盒
戊糖乳杆菌磷酸化自噬相关蛋白4D抗体Human Importin beta ELISA Kit小鼠可溶性血栓调节蛋白(sTM)试剂盒
7#---2号(网纹马勃)磷酸化肿瘤血管内皮标志物8抗体Human INTS4 ELISA Kit小鼠可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)试剂盒
木霉磷酸化自噬相关蛋白4A抗体Human INTS12 ELISA Kit小鼠可溶性髓系触发受体-1(sTREM-1)试剂盒
溶杆菌磷酸化自噬相关蛋白4C抗体Human INTS7 ELISA Kit小鼠可溶性瘦素受体(sLR)试剂盒
白金针菇—2号磷酸化自噬相关蛋白16A抗体Human INTS5 ELISA Kit小鼠可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)试剂盒
杨烂皮壳蕉孢菌磷酸化蛋白激酶AKT3抗体Human INTS9 ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)试剂盒
香菇磷酸化肾上腺素能受体β2抗体Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)试剂盒
间座壳磷酸化水通道蛋白2抗体Human ING5 ELISA Kit小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)试剂盒
丁香假单胞菌磷酸化自噬相关蛋白3抗体Human INMT ELISA Kit小鼠可溶性补体激活产物SC5b9 试剂盒
异常威克汉姆酵母缩酶2抗体Human INO80 ELISA Kit小鼠可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)试剂盒
登革病毒3型和4型检测试剂盒(荧光PCR法)荧光素Cy5标记链霉亲和素大豆苷,黄豆苷 (标准品)Human, Mouse, Rat
链霉亲和素大豆素,黄豆苷元(标准品)Human
性**结合球蛋白多肽大风子(标准品)Human, Mouse, Rat
凋亡抑制因子4(抗原)大腹皮(标准品)Human
链霉素偶联鸡卵白蛋白大果木姜子(标准品)Human, Mouse
状腺球蛋白大红袍(标准品)Human, Mouse, Rat
四环素偶联牛血清白蛋白大黄(掌叶大黄)(标准品)Human, Mouse, Rat
状腺素结合球蛋白抗原大黄(药用大黄)(标准品)Human, Mouse
四环素偶联鸡卵白蛋白大黄酚(标准品)Human, Mouse, Rat
磷酸化神经生长相关蛋白43抗体Phospho-NPM (Ser4)/FITC 荧光素标记磷酸化核仁磷酸蛋白抗体IgG
糖原合酶激酶-3β抗体Phospho-NPM (Thr95)/FITC 荧光素标记磷酸化核仁磷酸蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。