使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 罗斯河病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63981
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就��高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
短裙竹荪3-3ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体Human HSD17B2 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)试剂盒
纺锤形拟酵母精氨酸加压素受体2抗体Human HSD17B4 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)试剂盒
蒂莫内马赛菌凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体Human HSD17B6 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)试剂盒
苹果链格孢丝状肌动蛋白结合蛋白抗体Human HIST2H2AA4 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)试剂盒
长双歧杆菌抗凝血酶3抗体Human HMCN1 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)试剂盒
发酵假丝酵母人血清白蛋白单克隆抗体Human Histone-H3 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)试剂盒
牡丹葡萄孢载脂蛋白A4抗体Human HIST3H2A ELISA Kit小鼠骨保护素(OPG)试剂盒
黄色杆菌磷酸化Rho鸟苷酸交换因子2抗体Human HIGD1A ELISA Kit小鼠谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)试剂盒
百脉根中间根瘤菌磷酸化丝状肌动蛋白结合蛋白抗体Human HIGD1B ELISA Kit小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)试剂盒
天蓝色链霉菌肌动蛋白相关蛋白2/3亚型1A抗体Human HIVEP1 ELISA Kit小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)试剂盒
支气管败血波氏菌锚蛋白重复结构域蛋白32抗体Human Hikeshi ELISA Kit小鼠谷氨酸脱氢酶(GDH/GLDH)试剂盒
粪产碱菌粪亚种共济失调7样蛋白3B抗体Human HERC4 ELISA Kit小鼠孤腓肽(OFQ/N)试剂盒
平菇(科大杂优)感染性蛋白蛋白1抗体Human HEPACAM ELISA Kit小鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)试剂盒
酿酒酵母含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族5抗体Human HIGD1B ELISA Kit小鼠睾酮(T)试剂盒
污泥根瘤菌植物生长ABP1抗体Human HEPACAM ELISA Kit小鼠高铁血红蛋白(MHB)试剂盒
鸭疫里氏杆菌磷酸化活化复制因子2抗体Human Hikeshi ELISA Kit小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)试剂盒
罗斯河病毒检测试剂盒(荧光PCR法)应激诱导磷蛋白1抗体DIHYDROCARVONE, (-)-(RG)Human
14号染色体开放阅读框174(+)-二氢香芹 DIHYDROCARVONE, (+)-(RG)Human, Mouse
中断位点蛋白STIL抗体DIHYDROMYRISTICIN(P)Human, Mouse, Rat
纺锤体组装异常蛋白6抗体DIHYDROMYRISTICIN(P)Human, Mouse
减数分裂重组蛋白SPO11抗体二氢乌本(箭)苷 DIHYDROOUABAIN(RG)Human, Mouse, Rat
Smad蛋白E3泛素连接酶1抗体二氢杨梅素 DIHYDROMYRICETIN(P)Human
钠通道亚β4抗体二氢杨梅素 DIHYDROMYRICETIN(P)Human, Mouse
质交感分子1抗体二氢杨梅素 DIHYDROMYRICETIN(P)Human, Mouse
血清淀粉样蛋白4抗体二氢杨梅素 DIHYDROMYRICETIN(P)Human, Mouse
甘露糖脱水酶GMDS抗体NRF-1/FITC 荧光素标记核呼吸因子-1抗体IgG
糖皮质**调节元件结合蛋白1抗体Nrf2/FITC 荧光素标记核因子2相关因子2抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。