使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63983
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
高加索链霉菌β-乳球蛋白抗体Human HBA1 ELISA Kit小鼠钙结合蛋白(CR)试剂盒
Salinicoccus alkaliphilusβ-乳球蛋白抗体Human HERPUD2 ELISA Kit小鼠钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)试剂盒
Pilidium concavum缓激肽B2受体抗体Human HEATR4 ELISA Kit小鼠钙调素(CAM)试剂盒
金顶侧耳(榆黄蘑)丁酰胆碱酯酶抗体(N端)Human HES5 ELISA Kit小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)试剂盒
褐球固氮菌丁酰胆碱酯酶抗体(C端)Human HESX1 ELISA Kit小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)试剂盒
酿酒酵母BLAME抗体Human HEBP2 ELISA Kit小鼠肺炎支原体(MP)抗体(IgG)试剂盒
竹喙球菌巴曲霉素单克隆抗体Human HEBP1 ELISA Kit小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)试剂盒
酿酒酵母蛇巴曲酶抗体Human HECTD1 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)试剂盒
粉肉色杯伞溴脱氧尿苷抗体Human HECTD2 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)试剂盒
越南芽孢杆菌肿瘤/抗原2.2抗体Human HECTD3 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)试剂盒
肠球菌属肿瘤/抗原2.3抗体Human HELB ELISA Kit小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)试剂盒
互生枝顶孢肿瘤/抗原2.4抗体Human HDAC5 ELISA Kit小鼠肥大类胰蛋白酶(MCT)试剂盒
解鸟氨酸拉乌尔菌脑钠素/利钠肽抗体Human HDAC4(Histone deacetylase 4) ELISA Kit小鼠肥大/干生长因子受体(试剂盒/Sl/CD117)试剂盒
香菇B Raf抗体Human HDAC6 ELISA Kit小鼠芳香酶试剂盒
腐皮镰孢菌癌易感基因1抗体Human HAUS3 ELISA Kit小鼠二酰基甘油(DAG/DG)试剂盒
大肠埃希氏菌癌易感基因2抗体Human HAX1 ELISA Kit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)试剂盒
立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)硬脂亚钴
二氟化镍
二氢氧化镍
黑色氧化镍
硫镍
化镍
阮内镍
硝镍
氧化亚镍
谷氨酰转移酶GMPS抗体CD303/BDCA-2/CLEC4C 荧光素标记C型凝集素结构域家族4成员C抗体IgG
GDP甘露糖焦磷酸化酶B抗体CD304/BDCA-4/NRP-1 /FITC 荧光素标记神经纤毛蛋白-1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。