使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 黑龙江立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63987
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
树舌1-2磷酸化B-Raf抗体Human GSTM4 ELISA Kit小鼠雌二(E2)试剂盒
短小芽孢杆菌癌易感基因相互作用蛋白1抗体Human GSTO2 ELISA Kit小鼠垂草扁桃酸(VMA)试剂盒
短小芽孢杆菌磷酸化癌易感基因相互作用蛋白1抗体Human GSTM5 ELISA Kit小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)试剂盒
多形环纹炭团菌磷酸化相关死亡促进因子抗体Human GSTZ1 ELISA Kit小鼠程序性死亡1(PD-1)试剂盒
友好戈登氏菌磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体Human GSTT2B ELISA Kit小鼠成纤维生长因子9(FGF9)试剂盒
瑞士乳杆菌磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体Human GSX1 ELISA Kit小鼠成纤维生长因子8(FGF8)试剂盒
麦芽糖假丝酵母磷酸化B-Raf抗体Human GRK3 ELISA Kit小鼠成纤维生长因子6(FGF6)试剂盒
粗糙脉孢菌磷酸化B-Raf抗体Human GRK5 ELISA Kit小鼠成纤维生长因子4(FGF4)试剂盒
德夸菌素链霉菌磷酸化Bcl-xL蛋白抗体Human Mortalin(75 kDa glucose-regulated protein) ELISA Kit小鼠成纤维生长因子13(FGF-13)试剂盒
禾谷丝核菌高表达神经上皮蛋白BTG3抗体Human GTDC1 ELISA Kit小鼠成纤维生长因子10(FGF10)试剂盒
两型蜡蚧菌B迁移基因4抗体Human GRK6 ELISA Kit小鼠成神经瘤RAS 病(v-ras)癌基因同源物试剂盒
葡萄牙棒孢酵母BCL2相互作用蛋白质抗体Human GRPEL1 ELISA Kit小鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒
禾谷丝核菌大脑蛋白2抗体Human GSDMD ELISA Kit小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)试剂盒
伊平屋桥大洋芽孢杆菌B转录激活因子抗体Human GRWD1 ELISA Kit小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)试剂盒
白僵菌BCL6B抗体Human GSDMB ELISA Kit小鼠长停滞特异性基因产物6(gas-6)试剂盒
交链孢霉BAP31蛋白抗体Human GSPT1 ELISA Kit小鼠叉头框蛋白03(FoxP3)试剂盒
黑龙江立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体盐金刚乙(标准品) Yohimbine HCl
有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体盐金霉素(标准品) Phentolamine mesilate
DOM3Z蛋白抗体盐肼屈(标准品) Phentolamine mesilate
蓬乱蛋白2抗体盐卡替洛尔(标准品) Vemurafenib,PLX 4032
磷化蓬乱蛋白2抗体盐克林霉素(标准品) Praeruptorin E
转录下调蛋白1抗体盐喹那普利(标准品) Praeruptorin A
脱氢酶/还原酶家族成员2抗体盐拉贝洛尔(标准品) trans-Zeatin
牙本质磷蛋白抗体盐雷莫司琼(标准品) Dipotassium tetrachloroplatinate
Dermokine β蛋白抗体盐雷尼替丁(标准品) Cycloastragenol
G蛋白偶联受体GPR180蛋白抗体Ntn1/FITC 荧光素标记轴突导向因子1抗体IgG
G蛋白通路抑制物蛋白2抗体NT-3/FITC 荧光素标记神经营养因子-3抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。