PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 森林脑炎病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P63990
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
腐皮壳螺旋一环一螺旋蛋白5抗体Human GPR107 ELISA Kit小鼠白活化黏附因子(ALCAM)试剂盒
绿色素链霉菌二磷酸3核苷酸酶抗体Human GPR108 ELISA Kit小鼠白三烯E4(LTE4)试剂盒
微小杆菌脑蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶29抗体Human GPR116(G-protein coupled receptor 116) ELISA Kit小鼠白三烯D4(LTD4)试剂盒
灵芝智力发育调节相关蛋白BRWD3抗体Human GPR123 ELISA Kit小鼠白三烯C4(LTC4)试剂盒
水溶性非食用色素快速筛查盒生物素酶抗体Human GP repeat ELISA Kit小鼠白三烯B4(LTB4)试剂盒
蝉拟青霉Bax相互作用因子1抗体Human GPAA1 ELISA Kit小鼠白介素9(IL-9)试剂盒
高地芽孢杆菌表皮生长因子反应蛋白2抗体Human GPATCH2 ELISA Kit小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)试剂盒
平菇BCL2相关X蛋白抗体Human GPBP1 ELISA Kit小鼠白介素7(IL-7)试剂盒
蜡样芽孢杆菌Bcl2样凋亡蛋白13抗体Human GPATCH4(G patch domain-containing protein 4) ELISA Kit小鼠白介素6(IL-6)试剂盒
金黄壳囊孢菌Bcl2样凋亡蛋白14抗体Human GTF2A2 ELISA Kit小鼠白介素-5(IL-5)试剂盒
斑玉蕈Bcl2蛋白修饰因子抗体Human GTF2E1 ELISA Kit小鼠白介素4(IL-4)试剂盒
金针菇(毛柄菌、冬菇)骨形态发生蛋白11抗体Human GTF2F1 ELISA Kit小鼠白介素35(IL-35)试剂盒
大肠埃希菌BCL2样15促凋亡蛋白抗体Human GSG1L ELISA Kit小鼠白介素33(IL-33)试剂盒
蓝色犁头霉骨碱性磷酸酶抗体Human GSDMD ELISA Kit小鼠白介素31(IL-31)试剂盒
葡萄座腔菌磷酸化T连接蛋白抗体Human GSPT1 ELISA Kit小鼠白介素3(IL-3)试剂盒
金耳、 黄木耳磷酸化T连接蛋白抗体Human GSPT2 ELISA Kit小鼠白介素2受体β(IL2rb/CD122)试剂盒
森林脑炎病毒检测试剂盒(荧光PCR法)鱼骨钙素/骨谷氨蛋白具栖冬青苷(标准品)Human
大鼠表皮生长因子受体瞿麦(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠骨退化特异标志物卷柏(垫状卷柏)(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠Ⅰ型胶原C端肽卷柏(卷柏)(标准品)Human, Mouse
大鼠白介素2可溶性受体决明蒽醌;美决明子素(标准品)Human, Mouse
红螯光壳螯虾卵黄脂磷蛋白/卵黄磷蛋白决明子(标准品)Human, Mouse, Rat
兔心肌特异性肌钙蛋白T决明子(小决明)(标准品)Human, Mouse
人黏膜地址素黏附分子爵床(标准品)Human, Mouse, Rat
兔溶菌酶咖啡乙酯(标准品)Human
G蛋白偶联受体结合蛋白α14/Gα 14 抗体Nur77/GFRP/FITC 荧光素标记孤儿核受体蛋白Nur77抗体IgG
G蛋白β样蛋白抗体Phospho-Nur77 (Ser351) /FITC 荧光素标记磷酸化孤儿核受体蛋白Nur77抗体IgG