PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 猴痘病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64015
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
立枯丝核菌1号染色体开放阅读框67抗体Human EYA2 ELISA Kit兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)试剂盒
大肠埃希菌1号染色体开放阅读框83抗体Human EYA4 ELISA Kit兔子基质金属蛋白酶3(MMP-3)试剂盒
无色壳囊孢富含半胱氨酸分泌蛋白3抗体Human EZH1 ELISA Kit兔子基质金属蛋白酶13(MMP-13)试剂盒
角磷灰鹅膏菌肿瘤/抗原26抗体Human FAM101A ELISA Kit兔子肌钙蛋白C(TnC)试剂盒
匍匐曲霉周期蛋白依赖性激酶抑制剂2C抗体Human FAM111B ELISA Kit兔子黄体**素(LH)试剂盒
隆纹黑蛋巢Cullin2抗体Human EYA1 ELISA Kit兔子环磷酸鸟苷(cGMP)试剂盒
枯草芽孢杆菌钙调蛋白激酶CaMK1D抗体Human EYA3 ELISA Kit兔子核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)试剂盒
长枝木霉CHX10蛋白抗体Human EYA2 ELISA Kit兔子核因子κB(NF-κB)试剂盒
腹膜苍黄球菌畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体(C端)Human EXT2 ELISA Kit兔子胱天蛋白酶3(Casp-3)试剂盒
球孢白僵菌周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B抗体Human FAM105A ELISA Kit兔子骨形成蛋白2(BMP2)试剂盒
多杀性巴氏杆菌*畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体Human EXOC1 ELISA Kit兔子骨涎蛋白(BSP)试剂盒
鲍氏不动杆菌泛素连接酶蛋白CHFR抗体Human FAM105A ELISA Kit兔子骨胶原交联/Ⅰ型胶原C端肽(Cr/CTX-Ⅰ)试剂盒
酿酒酵母Cullin1抗体Human EXOC5 ELISA Kit兔子骨胶原交联(Cr)试剂盒
类干酪乳杆菌肌动蛋白结合蛋白CFL抗体Human EXOC6 ELISA Kit兔子骨碱性磷酸酶(BALP)试剂盒
斑玉蕈软骨衍生形态发生蛋白1抗体Human EXOC6B ELISA Kit兔子谷胱甘肽还原酶(GR)试剂盒
泡盛曲霉β-酪蛋白抗体Human EXOG ELISA Kit兔子谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)试剂盒
猴痘病毒检测试剂盒(荧光PCR法)载脂蛋白L3抗体生长**释放多肽(GHRP)检测试剂盒GHRP ELISA Kit
肿瘤/抗原81抗体生长**(GH)检测试剂盒GH ELISA Kit
共济失调蛋白7样2抗体生长分化因子15(GDF15)检测试剂盒GDF15 ELISA Kit
盐耐药蛋白ARS2抗体损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒Kim-1 ELISA Kit
芳香硫酯酶1抗体素前体(renin precursor)检测试剂盒renin precursor ELISA Kit
盐转运三磷腺苷酶抗体素(Renin)检测试剂盒Renin ELISA Kit
精氨tRNA的蛋白转移酶1抗体上腺髓质素(ADM)检测试剂盒ADM ELISA Kit
共济失调蛋白7样1抗体上腺素能a1A受体(ADRA1A)检测试剂盒ADRA1A ELISA Kit
孤独症易感因2蛋白抗体(自闭症相关蛋白1)上腺素(EPI)检测试剂盒EPI ELISA Kit
胰高血糖素抗体MAP3K8/TPL2/FITC 荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体IgG
线粒体甘油3磷酸酰转移酶抗体KEAP1/FITC 荧光素标记胞质接头蛋白Keap1抗体IgG