使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 非洲猪瘟病毒检测试剂盒(荧光PCR法)(快检)
规格: 50T
货号:BH-P64023
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进��,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
热带假丝酵母17号染色体开放阅读框77抗体Human EIF2B4 ELISA Kit兔肾素(Renin)试剂盒
节杆菌17号染色体开放阅读框78抗体Human EIF1AX ELISA Kit兔肾上腺素(EPI)试剂盒
Pseudarthrobacter维甲酸调节核基质相关蛋白抗体Human EIF3B ELISA Kit兔神经型乙酰胆碱受体亚基α7(CHRNA7)试剂盒
微杆菌17号染色体开放阅读框42抗体Human EIF3C ELISA Kit兔神经肽Y(NPY)试剂盒
酿酒酵母17号染色体开放阅读框97抗体Human EIF1AD ELISA Kit兔色素上皮衍生因子(PEDF)试剂盒
深蓝镰孢猫眼综合征染色体候选基因1抗体Human EIF3D ELISA Kit兔乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)试剂盒
树生黄单胞菌猫眼综合征染色体候选基因6抗体Human EIF1AY ELISA Kit兔溶菌酶(LZM)试剂盒
海洋杆菌21号染色体开放阅读框2抗体Human EIF1B ELISA Kit兔热休克蛋白70(HSP-70)试剂盒
美登木糖霉菌9号染色体开放阅读框86抗体Human EIF2A ELISA Kit兔热休克蛋白40(HSP-40)试剂盒
芽胞杆菌21号染色体开放阅读框128抗体Human EIF2AK1 ELISA Kit兔去甲肾上腺素(NA)试剂盒
酿酒酵母6号染色体开放阅读框62抗体Human EIF2S1(Eukaryotic translation initiation factor 2 subunit 1) ELISA Kit兔前列腺素F(PG-F)试剂盒
高加索球孢链霉菌CCZ1蛋白抗体Human EIF2B1 ELISA Kit兔葡萄糖-6-磷酸-1-脱氢酶(G6PD)试剂盒
中间气单胞菌脑蛋白5抗体Human EIF2S2 ELISA Kit兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)试剂盒
运动节杆菌21号染色体开放阅读框58抗体Human EIF2S3 ELISA Kit兔凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)试剂盒
根霉属20号染色体开放阅读框43抗体Human EIF3B ELISA Kit兔凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)试剂盒
大肠埃希氏杆菌9号染色体开放阅读框43抗体Human EIF1AD ELISA Kit兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒
非洲猪瘟病毒检测试剂盒(荧光PCR法)(快检)增殖相关核仁抗原抗体杨梅苷(标准品) Saccharin
NALP12抗体杨梅素-3-O-半乳糖苷 Phenolphthalein
富含亮氨重复结构域蛋白6抗体杨梅素/杨梅(标准品) Salicylic acid
富含亮氨重复结构域蛋白7抗体杨芽黄素(标准品) Propacetamol HCl
富含亮氨重复结构域蛋白9抗体洋艾素(标准品) Propacetamol HCl
富含亮氨重复结构域蛋白10抗体洋川芎内酯A(标准品) Naphazoline hydrochloride
钠钙交换蛋白2抗体洋川芎内酯H(标准品) POLYETHYLENE GLYCOL MONO-4-NONYLPHENYL ETHER
抑癌因NDRG2抗体洋川芎内酯I(标准品) 4,4'-Diaminodiphenylsulfone
DNA损伤关卡蛋白1抗体洋蓟素;1,5-二咖啡酰奎宁(标准品) Dimenhydrinate
G蛋白β2抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚2phospho-P53 (Ser20)/FITC 荧光素标记磷酸化肿瘤抑制因P53抗体IgG
G蛋白γ2抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白γ2抗体phospho-P53 (Ser315)/FITC 荧光素标记磷酸化肿瘤抑制因P53抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。