使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64033
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
��中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
大豆慢生根瘤菌末端补体复合物抗体Human CCNL1 ELISA Kit山羊白介素1β(IL-1β)试剂盒
多杀性巴氏杆菌8号染色体开放阅读框55抗体Human CD209 ELISA Kit山羊白介素1α(IL-1α)试剂盒
粗柄羊肚菌补体C4a+C4b蛋白抗体Human Cathepsin H ELISA Kit山羊白介素18(IL-18)试剂盒
大肠埃希菌CD44V7抗体Human CBP20 (NCBP 20 kDa subunit) ELISA Kit山羊白介素12(IL-12/P40)试剂盒
变灰链霉菌CD44V10抗体Human CCDC158 (Coiled-coil domain-containing protein 158) ELISA Kit山羊白介素10(IL-10)试剂盒
秀珍菇CD44V4抗体Human BTN3A1 (Butyrophilin Subfamily 3 Member A1) ELISA Kit山羊阿黑皮素原(POMC)试剂盒
大肠埃希氏菌紧密连接蛋白4抗体Human BBX(HMG box transcription factor BBX) ELISA Kit山羊γ干扰素(IFN-γ)试剂盒
盔形毕赤酵母6号染色体开放阅读框140抗体Human BTNL2(Butyrophilin-like protein 2) ELISA Kit山羊β-脂蛋白(β-LP)试剂盒
金横裂链霉菌L型钙通道蛋白抗体Human BCAS1 ELISA Kit山羊β内啡肽(β-EP)试剂盒
乳明串珠菌电压依赖性钙通道Cav3.1抗体Human BTNL8 ( Butyrophilin-like protein 8) ELISA Kit山羊α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒
热带假丝酵母紧密连接蛋白3抗体Human BubR1 (MAD3/BUB1-related protein kinase) ELISA Kit山羊toll样受体2(TLR2)试剂盒
露湿粘座孢霉(或露湿漆斑菌)磷酸化原癌基因c-Jun抗体Human BCAT1/ECA39 ELISA Kit山羊M型肌酸激酶(CKM)试剂盒
壳囊孢属磷酸化原癌基因c-Jun抗体Human BCL2L10 ELISA Kit山羊C型钠尿肽(CNP)试剂盒
穗状平脐蠕孢1号染色体开放阅读框86抗体Human BCL6(B-cell lymphoma 6 protein) ELISA Kit山羊C反应蛋白(CRP)试剂盒
芽胞杆菌8号染色体开放阅读框59抗体Human BRD9 (Bromodomain-containing protein 9) ELISA Kit山羊CD14分子(CDl4)试剂盒
紫色直丝链霉菌磷酸化补体成分5受体1抗体Human C14orf28 (Dopamine receptor-interacting protein 1) ELISA Kit山羊Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)试剂盒
牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒(荧光PCR法)真核翻译起始因子2C4抗体钙卫蛋白(CALP)检测试剂盒CALP ELISA Kit
Rho GTP酶激活蛋白15抗体钙通道阻滞剂(CCB)检测试剂盒CCB ELISA Kit
抑癌因结合蛋白ARID1B抗体钙调素(CAM)检测试剂盒CAM ELISA Kit
E3连接酶蛋白ARIH2抗体钙结合蛋白(CR)检测试剂盒CR ELISA Kit
ADP核糖化样因子1抗体钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)检测试剂盒iPLA2 ELISA Kit
ADP核糖化因子样蛋白4抗体分泌型**球蛋白A(sIgA)检测试剂盒sIgA ELISA Kit
肌动蛋白相关蛋白2/3抗体分泌型磷脂酶A2(sPLA2)检测试剂盒sPLA2 ELISA Kit
肌动蛋白相关蛋白2/3亚型2抗体肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)检测试剂盒PARC/CCL18 ELISA Kit
肌动蛋白相关蛋白2/3亚型4抗体肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)检测试剂盒SP-C ELISA Kit
生长抑制和分化相关蛋白抗体PAI-2/FITC 荧光素标记纤溶酶原激活物抑制因子2抗体体IgG
**中心相关核蛋白MCM3抗体PALB2/FITC 荧光素标记癌易感因相关蛋白2IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。