使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 小反刍兽疫病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64041
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
出芽短梗霉*22号染色体开放阅读框43抗体Human ACD ELISA Kit人载脂蛋白H(Apo-H)试剂盒
链霉菌C2CD3蛋白抗体Human AFAP1 ELISA Kit人载脂蛋白E(Apo-E)试剂盒
拟粉红锁掷孢酵母半胱酸蛋白酶蛋白14抗体Human ACBD3 ELISA Kit人载脂蛋白C3(Apo-C3)试剂盒
细孢毛霉3号染色体开放阅读框55抗体Human PAP(Prostatic acid phosphatase) ELISA Kit人载脂蛋白C2(Apo-C2)试剂盒
匍枝根霉(黑根霉)3号染色体开放阅读框65抗体Human ACO2(Aconitase 2) ELISA Kit人载脂蛋白C1(APO-C1)试剂盒
Aureimonas frigidaquae3号染色体开放阅读框14抗体Human ACADSB ELISA Kit人载脂蛋白B48(apo-B48)试剂盒
光帽鳞伞(滑菇)3号染色体开放阅读框20抗体Human ACAP1 ELISA Kit人载脂蛋白B100(Apo-B100)试剂盒
茶藨子葡萄座腔菌3号染色体开放阅读框23抗体Human ACADVL ELISA Kit人载脂蛋白A5(apo-A5)试剂盒
酿酒酵母3号染色体开放阅读框31抗体Human 14-3-3 epsilon ELISA Kit人载脂蛋白A4(Apo-A4)试剂盒
橄榄绿链霉菌3号染色体开放阅读框32抗体Human KCIP-1(14-3-3 GAMMA) ELISA Kit人载脂蛋白A2(apo-A2)试剂盒
白僵菌3号染色体开放阅读框36抗体Human anti-HSPA5(anti-Heat shock protein family A member 5) ELISA Kit人载脂蛋白A1(Apo-A1)抗体 试剂盒
冬菇属3号染色体开放阅读框38抗体Human A2LD1 ELISA Kit人载脂蛋白A1(Apo-A1)试剂盒
米曲霉3号染色体开放阅读框58抗体Human 4EBP1 ELISA Kit人运甲状腺素蛋白/前白蛋白(TTR)试剂盒
耐冷冷杆菌3号染色体开放阅读框62抗体Human A4GALT ELISA Kit人孕烯酮(PREG)试剂盒
普通链霉菌CD5抗体Human ERG(Transcriptional regulator ERG) ELISA Kit人孕酮受体(PGR)试剂盒
香菇补体C4BPA蛋白抗体Human AAMP ELISA Kit人孕酮和adipoQ 受体家族成员Ⅶ(PAQR7)试剂盒
小反刍兽疫病毒检测试剂盒(荧光PCR法)整合素样金属蛋白酶与凝血酶10型抗体胱天蛋白酶5(CASP-5)检测试剂盒CASP-5 ELISA Kit
嘌呤嘧啶核内切酶2抗体胱天蛋白酶3(Casp-3)检测试剂盒Casp-3 ELISA Kit
神经丝蛋白抗体胱天蛋白酶10(CASP-10)检测试剂盒CASP-10 ELISA Kit
β淀粉样肽(1-28)抗体骨粘连蛋白(ON)检测试剂盒ON ELISA Kit
有丝分裂激酶B抗体骨形成蛋白6(BMP-6)检测试剂盒BMP-6 ELISA Kit
软骨蛋白聚糖抗体骨形成蛋白(BMPs)检测试剂盒BMPs ELISA Kit
去整合素样金属蛋白酶10抗体骨涎蛋白(BSP)检测试剂盒BSP ELISA Kit
含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族9抗体骨退化特异标志物(CTX-2)检测试剂盒CTX-2 ELISA Kit
含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族8抗体骨特异性性磷酶B(ALP-B)检测试剂盒ALP-B ELISA Kit
GTP酶IMAP家族成员4抗体PAX8/FITC 荧光素标记配对盒因8抗体IgG
GTP酶IMAP家族成员5抗体PAX9/FITC 荧光素标记配对盒因9抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。