使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64056
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酿酒酵母钙粘附分子10抗体Human calprotectin ELISA Kit人胸腺表达趋化因子(TECK/CCL25)试剂盒
黄赭色链霉菌R Cadherin/CDH4Human Thrombin ELISA Kit人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)试剂盒
酿酒酵母大鼠细小病H-1株(H-1)抗体Human LPS IgG(lipopolysaccharide IgG) ELISA Kit人胸苷酸合成酶(TS)试剂盒
枯草芽孢杆菌22号染色体开放阅读框9抗体Human SCRG1(Scrapie responsive protein 1) ELISA Kit人性结合球蛋白(SHBG)试剂盒
微小杆菌肿瘤高表达周期相关蛋白抗体Human HGS(Hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substRate) ELISA Kit人性别决定区Y蛋白(SRY)试剂盒
酿酒酵母9号染色体开放阅读框117抗体Human AP12(Apelin 12) ELISA Kit人信号识别颗粒抗体(SRP)试剂盒
蚁巢伞属6号染色体开放阅读框120抗体Human calprotectin ELISA Kit人信号传导子及转录激活子6(STAT6)试剂盒
金灰青霉补体C1qα链多肽抗体Human ACCPA(anti-cyclic citrullinated peptide antibody) ELISA Kit人信号传导子及转录激活子5(STAT5)试剂盒
露湿漆斑菌补体C1qγ链多肽抗体Human Thrombin ELISA Kit人信号传导子及转录激活子4(STAT4)试剂盒
根瘤菌钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶抗体Human LPS IgG(lipopolysaccharide IgG) ELISA Kit人信号传导子及转录激活子3(STAT3)试剂盒
浅绿气球菌老年痴呆相关类钙粘蛋白CS2抗体Human SCRG1(Scrapie responsive protein 1) ELISA Kit人信号传导子及转录激活子2(STAT2)试剂盒
小青霉质多聚腺苷酸结合蛋白3抗体Human IL-12(p35)(Interleukin 12 p35) ELISA Kit人信号传导子及转录激活子1(STAT1)试剂盒
枯草芽孢杆菌Complexin I/复合素1抗体Human alpha 1 microglobulin ELISA Kit人新生甲状腺素(NN-T4)试剂盒
松杉灵芝Complexin II/复合素2抗体Human LAMTOR1(Ragulator complex protein LAMTOR1) ELISA Kit人新喋呤(NEOP)试剂盒
尖孢镰刀菌棉花专化型转录调节因子C/EBPγ抗体Human HAV-IgM(hepatitis A virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人锌转运蛋白6(ZnT6)试剂盒
梨头霉(+)质连接蛋白2抗体Human MYEF2(myelin expression factor 2) ELISA Kit人锌转运蛋白4(ZnT4)试剂盒
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)检测试剂盒(荧光PCR法)脂肪转运蛋白6抗体甜菜盐盐 Betaine Hydrochloride >98.0%(T)Human
电压门控钠通道5α抗体甜菜盐盐 Betaine Hydrochloride >98.0%(T)Human
因子信号传导抑制蛋白2抗体双(2-乙) Bis(2-chloroethyl) Ether >99.0%(GC)Human, Mouse
S100A1抗体1,2-双(2-乙氧)乙烷 1,2-Bis(2-chloroethoxy)ethane >98.0%(GC)Human, Mouse
磷钠协同转运蛋白抗体1,2-双(2-乙氧)乙烷 1,2-Bis(2-chloroethoxy)ethane >98.0%(GC)Human
因子信号传导抑制蛋白3抗体2,2'-联喹啉 2,2'-Biquinoline >98.0%(T)Human
信号转导分子Smad-2抗体2,2'-联喹啉 2,2'-Biquinoline >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
阴离子转运蛋白-1抗体4,4'-联吡啶 4,4'-Bipyridyl >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
泛素连接酶Siah24,4'-联吡啶 4,4'-Bipyridyl >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
生长抑制DNA损伤因34抗体PDK1/PDPK1/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠3磷酸肌依赖性蛋白激酶1抗体IgG
生长分化因子1抗体PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化3磷酸肌依赖性蛋白激酶1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。